古方青娥丸加味调控血小板膜糖蛋白受体及脂联素信号通路治疗早期非创伤性股骨头坏死的研究

If nontraumatic osteonecrosis of the femoral head（ONFH）progressed to collapse of the femoral head, artificial hip replacement was required. How to use a safe and effective treatment method for this disease to avoid or delay the time of artificial joint replacement is a difficulty and hot spot in the domain of orthopedics. Based on the traditional Chinese ethics, the cause of ONFH is kidney asthenia and blood stasis. Our previous studies shown that the effect of modified QingE pill in treating early stage ONFH was notable, but its mechanism remain unclear. Recently, we find that this disease was associated with an increase in the expression of platelet Membrane Glycoprotein GPIIb/IIIa and a decrease in the level of adiponectin, and there was a closed relationship among adiponectin signal pathway, lipid metabolism, angiogenesis, and bone metabolism. Based on this point, in the present study, molecular biology and immunotoxicology experimental technology will be used for identifying modified QingE pill's action on adiponectin signal pathway and the expression of platelet membrane glycoprotein receptor in patients with early stage of ONFH. Combined with the in vitro test, we will further elucidate the pathogenesis of the early stage ONFH, the herbal prescription's action target and providing theoretical basis for actual application of the traditional ancient formula.

非创伤性股骨头坏死（ONFH）发展至股骨头塌，需行人工髋关节置换。如何早期采取有效的治疗方法治愈或缓解该病，以避免或延缓行人工关节置换时间是骨科领域上的难点和热点。依据中医理论，ONFH多归因于肾虚血瘀。课题组前期临床运用青蛾加味丸治疗早期ONFH疗效确切，但其作用机理不明。近期我们发现：该病患者血小板膜糖蛋白(GP) IIb/IIIa等表达增高；血浆脂联素水平下降。理论上，GP受体表达异常易产生形成血栓，堵塞股骨头滋养血管，导致或加重骨质缺血坏死；脂联素及其受体信号转导通路与脂质代谢、血管新生及骨代谢密切相关。为此，本项目拟采用分子生物学和免疫学实验技术，动态观察青蛾丸治疗早期ONFH过程中，GP受体和脂联素信号转导通路变化；再结合体外试验，进一步阐早期ONFH的发病机理和治疗靶点，部分揭示青蛾丸治疗本病作用环节，为本方临床使用提供坚实实验依据，具有重大理论价值和临床意义。

背景：依据中医理论，非创伤性股骨头坏死（ ONFH） 多归因于肾虚血瘀。课题组前期临床运用青娥加味丸治疗早期 ONFH 疗效确切，但其作用机理不明。近期我们发现：该病患者血小板膜糖蛋白(GP)IIb/IIIa 等表达增高；血浆脂联素水平下降。理论上，GP 受体表达异常易产生形成血栓，堵塞股骨头滋养血管，导致或加重骨质缺血坏死；脂联素及其受体信号转导通路与脂质代谢、血管新生及骨代谢密切相关。主要内容：本项目采用流式细胞术、RT-PCR、免疫印迹、酶联免疫吸附试验等分子生物学和免疫学实验技术，动态观察青娥丸加味治疗早期非创伤性股骨头缺血性坏死过程中，血小板膜糖蛋白受体和脂联素及其受体表达变化，再结合相关体外试验，进一步阐明了非创伤性 ONFH 的发病机理和治疗靶点，揭示青娥丸加味治疗本病的作用机制，为本方的临床使用提供坚实的实验依据。重要结果：加味青娥丸可有效改善早期缺血性股骨头坏死患者TNF-α和NO等相关因子水平，调节骨代谢，缓解骨髓水肿及临床症状；可通过提高非创伤性股骨头坏死患者低于正常的ADAM17含量，调节其介导的血小板膜糖蛋白受体水解活性，改善血液高凝状态，对股骨头坏死疾病的进展起到良好的治疗作用；可通过调节股骨头坏死患者脂联素信号通路相关受体受体mRNA及饥饿素水平，改善脂质代谢状态，是该方治疗非创伤性股骨头坏死患者的作用靶点机制之一。本研究还发现非创伤性ONFH患者的CEACAM1的表达与脂联素信号转导通路相关分子的表达关系密切。科学意义：本研究以早期非创伤性 ONFH 对象，应用现代医学分子生物学新技术，拟从血小板活化、膜糖蛋白受体和脂联素信号转导通路等方面阐明其病因病机，按照肾活血法治疗原则，应用加味青娥丸治疗本病而取效，系我们研究组的优势和创新。本项目在上述基础上，进一步研究了古方青娥丸调控血小板膜糖蛋白受体及脂联素信号转导通路治疗非创伤性股骨头坏死的疗效机理，有利于发展中医药治疗“骨蚀、骨萎”的理论和实践。