出血性血小板病ADAM17和Calmodulin介导的血小板GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ亚基水解活性研究及益气活血方的干预效应

出血性血小板病(HT)是一组血小板聚集异常性出血性疾病。中药益气活血方治疗该病疗效显著，但机理尚未完全阐明。本课题组长期致力HT研究，前期发现该病的vWF和凝血酶共同受体，血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ及其亚基GPIbα表达下调。近期发现GPIbα胞外段过度水解是其水平下降的重要原因。新近发现，ADAM17和Calmodulin可正负调节GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ亚基GPIbα和GPⅤ胞外段水解，这提示HT发病过程中，可能存在ADAM17与Calmodulin调节异常，过度水解GPIbα和GPⅤ胞外段功能区，导致血小板聚集不良。为此，本项目拟采用免疫印迹、激光共聚焦、流式细胞术、ELISA等法，观察ADAM17与Calmodulin在HT中的表达及其介导的GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ亚基水解活性，同时研究益气活血方对上述作用的影响，以期进一步阐明HT发病机理和益气活血方作用机制，具有重大理论价值和临床意义。

目的：本项目研究了212例出血性血小板病患者ADAM17、GPIbα和GC的表达变化。在此基础上，运用中药消瘀止血片治疗，重点观察该方对出血性血小板病患者ADAM17、GPIbα和GC表达的影响，探讨其治疗该病的可能机制。方法：212例出血性血小板病患者随机分为两组，中药组142例用消瘀止血片治疗；西药组70例用安络血、维生素C、K、P 治疗，两组均治疗6个月。观察两组治疗后止血疗效及血小板聚集恢复率。采用流式细胞术检测了两组治疗前后及52例健康人的血小板膜糖蛋GP Ibα的表达，采用双抗体夹心 ABC-ELISA法检测血清ADAM17和血浆GC。结果：中药组有11例患者（5例无效脱落，6例依从性差），西药组有12例（7例无效脱落，5例依从性差）未完成观察。中药组止血总有效率为83.82％；西药组为46.15％ (P<0.01)；中药组血小板聚集功能恢复率67.94％，西药组仅5.17％（P<0.01)。两组患者治疗前血小板GP Ibα表达荧光强度均低于正常人（P<0.05），而血浆GC及ADAM17含量增高（P<0.05）。经中药治疗后，患者的GP Ibα表达增加，与正常组比较差异无显著性（P>0.05），而明显优于西药组（P<0.05）；ADAM17及CG含量明显下降，与西药组比较有统计学差异（P<0.05）；结论：出血性血小板病患者GC含量增高，在出血期患者更加明显，且与GP I bα的水平呈明显负相关，与ADAM17对GP I bα过度水解有关。消瘀止血片可通过部分抑制ADAM17对GP I bα过度水解，从而在受体蛋白水平上调节血小板凝血酶受体的表达是其治疗出血性血小板病的疗效机理之一。