基于"女子多郁"及雌激素受体介导的Ca2+/ cAMP信号通路的围绝经期综合征肝郁的机制研究

围绝经期综合征（PPS）是影响女性健康的重要疾病，准确把握本病的证及病机是提高中医疗效的关键。本课题组前期的研究工作基础表明，肝郁是围绝经期综合征的核心病机，贯穿于疾病全过程。从肝郁论治PPS，开展肝郁证的遗传基础及分子生物学机制研究，将有助于中医的特色和优势的发挥。因此，本研究拟在此基础上，基于"女子多郁"的理论,采用临床研究与动物实验相结合的方法：（1）从雌激素受体(ER)基因多态性，探讨PPS肝郁证与先天因素的关系，从ER基因DNA甲基化的表观遗传学角度，探讨肝郁证候形成的多样性；（2）从ER介导的Ca2+/ cAMP信号通路对中枢神经递质的调节，探讨肝郁证与雌激素及神经递质的关系；（3）采用柴胡舒肝散（CHSGS）进行干预，从方证对应的角度为PPS肝郁的辨识和分子生物学机制研究提供依据。从而进一步丰富了肝郁证的病机理论，诠释"女子多郁"的科学内涵，也为PPS的预防、诊断和治疗服务。

本项目旨在探讨围绝经期综合征肝郁证的病理特点、遗传基础及分子生物学机制。运用临床研究与动物实验相结合的方法，分别检测了观察对象的雌激素、单胺类神经递质、雌激素受体(ER)基因多态性、ER基因DNA甲基化水平、Ca2+/ cAMP信号通路相关基因表达，采用柴胡舒肝散进行干预后检测相关指标。结果：.（1）PPS肝郁证病理特点：PPS的病位证素以肝为主，涉及肾、脾、心，病性证素以气滞为主，涉及阴虚、血虚、气虚，证素分布呈现多脏分布、虚实夹杂特点，肝郁是其主要病理特点，症状以阵发性烘热，汗出，急躁易怒，情绪抑郁或焦虑，月经紊乱，胸闷、失眠，喜太息，心悸，咽部异物感等为主。.（2）PPS肝郁证遗传基础：PPS肝郁证与先天因素有相关性，ERβ-rs3020444-TT型可能是PPS肝郁证易感的遗传基础之一；PPS肝郁兼杂的易感性与ERα-rs9340799、ERβ-rs3020444、Erβ-rs1256030基因型有关；ERα基因启动子甲基化状态升高可能是导致PPS肝郁大鼠海马组织ERαmRNA/ ERβmRNA表达比例下调的部分原因。.（3）PPS肝郁证分子生物学机制：PPS患者DA和NE的降低可能是肝郁发生的分子生物学基础， PPS单胺类神经递质的变化与肝郁兼杂特点密切相关。PPS大鼠肝郁证与海马及周围血的E2神经递质的表达与有密切关系，与海马细胞的雌激素、雌激素受体ERαmRNA/ ERβmRNA比值表达有密切关系；PPS大鼠肝郁证与海马区Ca2+/CaMKII通路有密切关系，与海马Ca2+ /cAMP通路调节神经传导的基因表达变化有关系，Ca2+ /cAMP信号通路上S100g，SSt，Th，NOS2以及Calm1，IL-2等基因表达改变可能是PPS肝郁证的分子学机制； .（4）柴胡疏肝散干预结果：PPS患者干预前后Kupperman法症状评分及肝郁病理积分显著改善，肝郁病理分级与血清E2有显著负性相关关系，与5-HT，NE，DA有显著负相关，说明肝郁是PPS主要病理，E2和神经递质改变是肝郁证的生物学基础；围绝经期综合征大鼠肝郁证与HPA轴上ACTH,CORT,CRH表达有关，柴胡疏肝散可以调节该轴功能；柴胡疏肝散能改善PPS肝郁证大鼠的行为，作用机制可能和提高海马中EAK1-2的表达有关。