Akt抑制剂Perifosine抑制神经母细胞瘤生长新机制的研究

Neuroblastoma (NB) is the most common extracranial solid tumor which derives from neural crest in children. As a tumor suppressor gene, P53 mutation is one of the main reasons for chemo-resistance and treatment failure in NB. Applicants found that Akt inhibitor Perifosine has anti-tumor growth effect, and NB cells/tumors with P53 mutation are more sensitive to it. A pioneering microarray study on a P53 mutated NB cell line treated with Perifosine indicates that P53 pathway is the most related pathway after Perifosine treatment. So, in this study we will further prove this finding in other P53 mutated NB cell lines, and by comparing to P53 wild type cells we will investigate the Perifosine effect on conformation changes to mutated P53, on tumor suppressor function lost by P53 mutation, and on the P53-mediated apoptosis pathway. We will also perform a combination study between Perifosine and chemotherapeutic drugs to study the changes of the chemo-sensitivity of NB cells/tumors in the presence of Perifosine, and the relationship between the changes and P53 signaling pathway. The goal of this study is to investigate the novel mechanism of perifosine effect on tumor growth inhibition and to look for new treatment for the P53 mutation-induced chemo-resistance. Our study will provide evidences for the improvement of treatment efficacy in NB, especially in those with P53 mutation and poor prognosis.

神经母细胞瘤（NB）是起源于神经嵴的小儿常见颅外恶性实体瘤。作为肿瘤抑制基因，P53突变是肿瘤细胞产生耐药导致治疗失败的重要原因之一。申请者发现，Akt抑制剂Perifosine可抑制NB肿瘤生长，而且P53突变肿瘤对其更敏感。前期对一P53突变NB细胞系microarray结果分析显示，P53信号通路是与Perifosine治疗最相关的通路。所以本项目将进一步在P53突变细胞系中证实该发现，并通过与P53野生型细胞的比较，研究Perifosine对突变型P53构象、对因突变而丧失的肿瘤抑制基因功能及对P53介导的凋亡通路的影响；同时，通过Perifosine与化疗药物联合使用，观察Perifosine治疗后NB的化疗敏感性的改变及与P53信号通路的关系。旨在探索Perifosine抑制肿瘤细胞生长新的作用机理，寻找解决P53突变引起的耐药新方法，为NB治疗提供新的、有效的理论指导。

结题摘要：本项目主要进行Perifosine治疗神经母细胞瘤（NB）新机制的研究。我们用Perifosine处理神经母细胞瘤细胞后提取RNA进行基因芯片分析，利用IPA分析软件，通过比较差异表达基因相关的信号通路来寻找可能的作用新机制。在实验过程中我们意识到在细胞生理病理过程中发挥作用的是蛋白质分子，为了深入研究，我们用Perifosine处理神经母细胞瘤细胞后提取蛋白质进行蛋白质组学研究，同时与基因芯片结果进行比较。在此基础上进行进一步验证和研究筛选出的靶分子的生物学功能。我们的研究发现，在具有P53突变、对常规化疗药物敏感性较低的神经母细胞瘤细胞中，Bcl-2家族的多个参与凋亡的分子和参与细胞周期的分子在Perifosine处理后有明显的变化，但P53的RNA和蛋白质的表达水平并没有明显变化。另外，在蛋白质组学结果分析过程中，我们发现了有潜在研究价值的Perifosine处理后上调或下调蛋白分子、蛋白质复合物及蛋白质结构域。部分分子我们进行了生物学功能研究，并得到了相应的结果。.通过本项研究我们不仅寻找到Perifosine在神经母细胞瘤治疗中的作用和机制，还会帮助我们筛选到新的在治疗中有价值的生物靶分子，为神经母细胞瘤治疗提供新的、重要的理论依据。