苦参碱逆转ABCG2介导白血病细胞多药耐药的机制研究

白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，反复化疗导致多药耐药性（MDR）的产生是其治疗失败的主要原因，ABCG2是MDR过程的关键蛋白。资料表明苦参碱具有拮抗MDR的作用，它是否是通过干扰ABCG2的空间构象，从而发挥效应？本研究针对该问题，检测苦参碱处理前后，白血病细胞内化疗药物聚集浓度变化及ABCG2表达量变化，明确苦参碱对MDR的抑制作用；原核表达ABCG2蛋白并纯化后，采用多种结构生物学技术，获得苦参碱与ABCG2互作相关参数，明确逆转MDR的分子机制；利用电喷雾离子化飞行时间质谱法检测ABCG2溶液中二聚体含量及ATP酶活性变化；利用RNAi技术沉默细胞ABCG2基因后，外源导入ABCG2的真核表达载体，检测苦参碱对不同ABCG2表达水平的细胞药物外排泵功能的影响及ABCG2表达量改变。本项目将深化对苦参碱逆转MDR机制的理解，为筛选白血病MDR中药抑制剂提供分子生物学相关信息。

白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，反复化疗导致多药耐药性（MDR）的产生是其治疗失败的主要原因，ABCG2 是MDR 过程的关键蛋白。资料表明苦参碱具有拮抗MDR 的作用，它是否是通过干扰ABCG2 的空间构象，从而发挥效应？本研究针对该问题，首先检测多种细胞系中ABCG2的mRNA表达水平，并且检测苦参碱处理前后，白血病细胞内化疗药物聚集浓度变化及ABCG2 表达量变化，明确苦参碱对MDR 的抑制作用；利用荧光淬灭法、圆二色光谱法及等温滴定量热法，研究苦参碱与ABCG2纯化蛋白互作对ABCG2结构的影响；利用流式细胞术及激光共聚焦技术，研究苦参碱与ABCG2互作对ABCG2功能的影响，明确逆转MDR 的分子机制；利用RNAi技术沉默细胞ABCG2 基因后，外源导入ABCG2 的真核表达载体，检测苦参碱对不同ABCG2 表达水平的细胞药物外排泵功能的影响及ABCG2 表达量改变。本项目将深入研究ABCG2在白血病多药耐药中所发挥的功能，并深化对苦参碱逆转MDR机制的理解，为筛选白血病MDR中药抑制剂提供分子生物学相关信息。