苦参碱作用人乳腺癌细胞AKt靶基因逆转多药耐药的分子机制研究

Breast carcinoma is the most common malignancy in woman.Multidrug resistance (MDR) reduces the curative effect of breast cancer seriously.New researches show PI3K/AKt signal pathway is closely relate with MDR.AKt is its core target spot and the activity of AKt affect MDR intimately.Our early researches show that matrine has clear character of anti-tumour and reversing MDR,which can affect rate of bcl-2/Bax obviously,increasing the expression of Fas,Cleaved Caspase-3.Matrine can drop the level of cell phosphorylation and decrease the protein expression of P-gp and MRP sharply, but the molecular mechanism of matrine reversing MDR remains elusive. this project plans to use AKt as cancer target gene,the variation of AKt can be detected through matrine affection in vitro and invo，we plan to detecte the expression influence of MDR gene,such as MDR1,MRP,TOPOⅡ.The influence of PTEN,NF-кB,Caspase can also be detected.Further discuss the correlation between reversing MDR and PI3K/AKT,NF-кB signal pathway will be analysised. We will test and verify that matrine is a kind of natural AKt active inhibitor and multidrug reversals or not,The results will offer the basis for molecular targeted therapy and add new scheme of chemotherapy.

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，多药耐药性（MDR）严重降低了乳腺癌的化疗效果,新近研究表明PI3K/AKt信号通路与MDR密切相关，AKt是其核心靶点，AKt的活性密切影响MDR。我们前期研究发现苦参碱具有抗肿瘤、逆转MDR的作用，苦参碱可明显影响乳腺癌Bcl-2/Bax的比率，增加Fas、Cleaved Caspase-3的表达，降低细胞p-AKt及P-gp、MRP的表达,但苦参碱是否作用AKt靶基因及逆转MDR的分子机制不清楚；本项目拟通过体外、内试验研究苦参碱作用p-Akt水平的变化，对耐药基因MDR1、MRP、TOPOⅡ酶及PTEN、NF-кB、Caspase等表达的影响，探讨苦参碱是否通过作用AKt靶基因逆转MDR及与PI3K/AKt、NF-kB信号通路的相互作用关系，分析其分子机制，验证苦参碱是否是一种天然AKt活性抑制剂和耐药逆转剂，为分子靶向治疗及增加新的化疗方案提供依据。

化疗是乳腺癌的重要辅助治疗手段,肿瘤的多药耐药性（MDR）严重降低了化疗效果,导致肿瘤复发转移。研究表明PI3K/AKt信号通路与MDR密切相关。.该研究体外用MTT法检测苦参碱和MK2206对MCF-7/ADR细胞的生长抑制、化疗协同及逆转耐药作用；用RT-PCR、Western blot方法检测苦参碱作用MCF-7/ADR细胞MDR1、MRP1、PTEN、AKT、bcl-2、bax、caspase-3、PARP等相关基因mRNA和蛋白的表达。结果表明：不同浓度的苦参碱（0-2.5mg/ml）对MCF-7/ADR细胞有明显的生长抑制作用，苦参碱对细胞的IC50约为0.94mg/ml。0.6g/L苦参碱组和0.05umol/LMK2206组的MCF-7/ADR细胞抑制率无明显差异（P>0.05）。.苦参碱联合化疗药物对人乳腺癌细胞有一定的协同作用，其最大.抑制率分别为：ADR：79.01%，5-Fu：75.41%，MMC：71.63%，MTX：52.62%。加0.2mg/ml的Mat后，MCF-7/ADR细胞内的ADR积累增加了3.56倍。体内裸鼠模型抑瘤率的比较：给药21d 后，阳性对照组和苦参碱低、高剂量组抑瘤率分别为37.9%、42.1%和60.7%。.RT-PCR及Western blot检测结果显示0.6、1.2g/L的干预组与空白对照组相比，随着苦参碱浓度的提高MDR1、MRP1的表达量逐渐降低，PI3K/AKT信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而AKT基因的表达量逐渐降低；bcl-2、p65的相对表达量逐渐降低，bax、PARP和GSK-3β基因的相对表达量逐渐增高而Caspase-3基因的表达量变化不明显；相同抑制率的苦参碱组（0.6g/L）和MK2206组(0.05μmol/L)相比，两组降低MDR1、MRP1、AKT基因表达量的差异不明显(P>0.05)。.苦参碱对乳腺癌细胞具有明显生长抑制作用，和化疗药有协同作用，具有逆转乳腺癌多药耐药的作用，其机制可能与作用靶AKT基因抑制PI3K/AKT信号通路，启动通路的下游凋亡因子的表达，激活NF-kB信号通路，发挥凋亡效应逆转肿瘤耐药，抑制肿瘤的生长。.苦参碱可能是一种天然AKt活性抑制剂和耐药逆转剂，为分子靶向治疗及增加新的化疗方案提供理论依据。