CagA 抑制胃上皮细胞自噬及其在慢性胃炎发生中的作用机制研究

H. pylori is a major human pathogenic bacterium which is strongly linked to the development of gastritis. CagA + strain possesses high virulence and pathogenicity. Autophagy as a self protection mechanism, can degradate VacA through the lysosomal pathway. The team found that autophagy induced by CagA + Hp infection in gastric epithelium cells is restrained, at the same time, the level of IL-8 increased after autophagy is inhibited. Whether CagA as an autophagy inhibitory factor play a key role during Hp infection should be discussed. Hp infection can activate c-Met, and then phosphorylased c-Met interact with CagA which transport through the Ⅳ secrete system, and then PI3K/Akt /mTOR signal way was activated to inhibit autophagy. This subject intends to use CagA knockout strains to infect, and the eukaryotic expression plasmid of CagA to transfect gastric epithelium cells. The aim is to detect for autophagy inhibited by CagA in gastric epithelium cells and the influence of inflammation, and to clarify the mechanism and provide theoretical guidance of new means for treat Hp infection.

Hp是慢性胃炎的致病菌，CagA+菌株具有高毒力，致病性强。自噬作为机体自我保护机制，可通过溶酶体途径降解Hp毒力分子VacA, 在Hp感染中发挥保护胃上皮细胞的作用。课题组前期发现CagA+Hp感染引起的胃上皮细胞自噬受到抑制，同时自噬抑制后，IL-8水平增加。是否CagA作为自噬抑制因子在Hp的致病中发挥关键作用值得探讨。Hp感染可活化胃黏膜上皮细胞内c-Met, c-Met进而发生自身磷酸化并与通过Ⅳ分泌系统转运至胃上皮细胞内的CagA 发生相互作用， 进而活化PI3K/Akt信号途径, 作用于 mTOR抑制自噬，导致慢性胃炎发生。本课题拟运用CagA敲除菌株感染以及CagA真核表达质粒转染胃上皮细胞模型，观察CagA对Hp诱导胃上皮细胞自噬以及自噬抑制对胃上皮细胞炎症反应的影响，以期阐明CagA抑制自噬的机制，为寻找Hp感染治疗的新手段提供理论指导。

【研究背景】CagA+H. pylori 相关性慢性胃炎患者胃粘膜损害程度较重，与慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的关系密切。自噬作为机体自我保护的生理学行为，在抗病原微生物感染以及其导致的炎症中发挥重要作用。前期我们发现CagA具有抑制H. pylori够诱导胃上皮细胞自噬的作用，但其具体机制不明。.【研究目的】评价H. pylori感染胃上皮细胞诱导自噬发生的过程中CagA对自噬的抑制作用；观察自噬抑制对H. pylori感染引起的炎症反应的影响；探讨CagA负性调控H. pylori诱导的胃上皮细胞自噬的机制。.【研究方法】Western-blot、激光共聚焦、电镜以及流式细胞技术分别检测Hp-WT 或 Hp-△CagA感染人胃上皮细胞自噬模型和临床胃粘膜标本自噬水平；检测体外过表达CagA对Rapamycin诱导自噬的影响；使用化学药物法抑制自噬或利用siRNA技术阻断自噬，ELISA分别检测Hp-WT和Hp-△CagA两种菌株感染诱导炎症因子分泌的水平，荧光素酶法检测NF-κB荧光素酶报告基因活性； Western-blot检测PI3K/Akt/mTOR信号途径是否参与了H. pylori感染过程中CagA对自噬的抑制作用；利用siRNA沉默c-Met表达，Western-blot、激光共聚焦显微镜、流式细胞技术检测H. pylori感染诱导的自噬情况。.【主要结论】 CagA具有抑制H. pylori诱导胃上皮细胞自噬的作用；抑制自噬可以增强Hp-△CagA感染介导的炎症程度；CagA可能通过PI3K/Akt/mTOR信号途径介导了H. pylori感染过程中对自噬的抑制作用；c-Met分子可能参与了CagA抑制H. pylori感染胃上皮细胞自噬过程。.【研究意义】 研究首次提出幽门螺杆菌CagA作为一种负性调控因子，通过抑制自噬引起慢性胃炎的新观点，并在体内外从现象到机制进行了探讨，为深入理解和认识H. pylori慢性感染致病机制、寻找H. pylori感染有效防治手段提供了新的视角。