miR-30b在幽门螺杆菌诱导的胃上皮细胞自噬调节与持续性感染发生中的机制研究

幽门螺杆菌(Hp)感染能够诱导胃上皮细胞发生自噬。自噬作为机体自我保护的生理机制，在抗Hp感染以及其持续性感染中发挥重要作用。若自噬不能有效清除该菌,可导致其在自噬体中生存繁殖而发生持续感染，引起慢性胃炎、消化性溃疡，甚至胃癌的发生。大量证据表明，microRNA能调节自噬发生过程。Hp感染引起的慢性炎症过程中，microRNA表达谱发生表达失衡，miR-30b表达出现升高并抑制Hp感染所致的自噬发生，但目前具体机制尚不清楚。生物信息学分析结果显示：Beclin1和Atg12作为自噬发生的关键信号分子，可作为miR-30b的靶蛋白。本项目拟分别在体内、体外，通过上调或下调miR-30b,观察Hp感染引起的胃上皮细胞自噬的变化，以及自噬对该菌的清除情况，以期阐明miR-30b在幽门螺杆菌诱导的胃上皮细胞自噬调节与持续性感染发生的机制,为寻找Hp慢性持续性感染新的治疗手段提供理论依据.

幽门螺杆菌(H. pylori)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素，与胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的发病密切相关，WHO已将其列为第一类致癌因子。一般认为，H. pylori是一种胞外致病菌，但越来越多的证据显示该菌能在胃上皮细胞中生存增殖，抗生素和机体免疫反应均不能清除胞内的H. pylori而导致持续性感染引起胃部疾病的发生。深入阐明H. pylori慢性感染机制对揭示其致病机理、发展新的有效的H. pylori感染治疗手段具有重要的理论指导意义。.课题组前期研究发现MIR30B不仅在体外感染模型中表达升高，而且在临床活检标本中也观察到MIR30B表达量在H. pylori感染组胃粘膜组织显著高于未感染组。另外， MIR30B能明显抑制自噬信号蛋白LC3的Ⅰ型向Ⅱ型转变，以及抑制GFP-LC3的荧光蛋白聚集，提示MIR30B参与了H. pylori引起的自噬调控。BECN1和ATG12作为自噬信号通路上的两个重要分子,生物信息学分析显示：它们可能是MIR30B的靶标蛋白。为此提出如下机制设想：MIR30B通过调节自噬通路中的信号蛋白BECN1和ATG12而发挥抑制作用，从而影响到H. pylori被清除，导致H. pylori在自噬体中生存繁殖而发生持续感染，引起慢性胃炎、消化性溃疡等疾病。本研究通过H. pylori感染人胃上皮细胞自噬模型和临床胃粘膜标本的检测，以MIR30B为研究对象，采用实时定量PCR技术对其表达进行鉴定；分别转染MIR30B模拟物及抑制剂上调和下调胞内MIR30B的水平，采用Western-blot、激光共聚焦、电镜等技术观察MIR30B在H. pylori感染中的自噬变化；结合生物信息学和萤光素酶实验等鉴定MIR30B的靶基因--BECN1和ATG12；并进一步通过庆大霉素保护实验和免疫荧光实验研究MIR30B抑制自噬对胞内H. pylori的清除作用。获得以下研究结果1)H. pylori感染能够诱导AGS细胞自噬，抑制自噬可促进H. pylori的胞内存活。2)预测并鉴定了MIR30B的靶基因：BECN1和ATG12，MIR30B通过转录水平抑制其靶基因从而扰乱自噬。3)与未感染H. pylori人群相比，感染病人自噬水平降低且与MIR30B呈负相关。4)MIR30B可通过抑制其靶蛋白有利于H. pylori在胞内存活。