基于微量、快速的活性筛选体系快速发现抗溃疡性结肠炎的查尔酮成分及其深层次作用机制研究

Our previous studies show that: GCH and licochalcone A treated UC by inhibiting activity of NF-κB which is closely related to occurring、 developing and prognosis of UC.GCH, without liquiritin、liquiritigenin glycyrrhizic acid, etc., has excellent activity on UC compared with SASP、water soluble flavonoids from licorice(include liquiritin、liquiritigenin,etc.)、glycyrrhizic acid、Shaogan Tang and its effective components. Meanwhile, the activity of GCH changed with the content variation. In this project, we plan on screening active substance in GCH by a simple method based on UPLC/Q-TOF MS combined NF-κB dual-liciferase reporter assay system. Chemical constituents of GCH were submit to Molinspiration、PharmMapper and KEGG bioinformatics software for predicting their absorption parameters, target proteins and related pathways, respectively. And detect the expression of key inflammatory genes for the study of anti-UC mechanism of active substance. Study on the changes of IκBα、IKKβand UPP that are in the process of development and repair of UC. In order to lay a foundation of further medicine development and precise quality control, or find leading compounds.

前期发现：甘草查尔酮组分（GCH）及甘草查尔酮A通过抑制与溃疡性结肠炎（UC）发生、发展及转归密切相关的NF-κB通路发挥治疗作用，GCH（不含甘草苷、甘草素等已知甘草抗溃疡黄酮成分，也不含甘草酸等抗炎三萜成分），比阳性药柳氮磺胺吡啶、水溶性黄酮（甘草苷等）、甘草酸、临床治疗UC的芍甘汤及有效组分有更好的抗UC作用。然而，GCH化学成分相对比例的变化会引起活性的较大差异。基于此，项目以一种快速、微量的筛选系统从GCH中筛选NF-κB抑制剂从而发现抗UC活性物质；利用反向对接虚拟预测GCH可吸收化学成分的作用靶点、通路，检测虚拟筛选出的炎症相关通路关键基因表达，寻找活性物质发挥抗溃疡活性的信号途径，揭示活性物质协同作用的靶点、通路；基于前期机制研究，进一步探讨活性物质抑制NF-κB活化的IκB磷酸化及泛素化机制，揭示深层次作用机理。为组分中药开发及精准质量控制或活性先导化合物的发现奠定基础。

甘草渣总黄酮具有拮抗溃疡性结肠炎的作用，但同时化学组成的变化会带来活性的较大差异，因此探明其活性物质组成为后期开发的必要前提。课题结合UPLC/Q-TOF/MS和体内外试验系统筛选甘草渣总黄酮中的抗炎成分，在发现核心查尔酮的基础上，还筛选出了异戊烯基类黄酮和萜类成分，获得了更全面的活性成分信息，并深入阐释了甘草渣总黄酮中活性物质组的作用特点，为后期开发提供了重要数据基础。主要完成了四方面的工作，并进行了拓展研究。（1）从甘草渣总黄酮中筛选出4个活性成分（1个查尔酮类黄酮、2个异戊烯基类黄酮、1个萜类成分），证实了核心成分——Licochalcone A抑制溃疡性结肠炎，通过HuR 及miR-195促进肠上皮细胞增殖和损伤修复，通过miR-144-3p调节H292细胞内质网应激和细胞凋亡，从多角度阐释了其药理作用及机制。（2）在协同抗炎及细胞保护活性成分筛选基础上，研究核心物质组Licochalcone A和Licoflavone B对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的调节作用。结果，二者均可通过调节小鼠肠道菌群结构发挥抑制溃疡性结肠炎的作用，并呈现出不同的作用特点，但总体上都是减少有害菌的同时促进有益菌的定植与生长。（3）Licoflavone C通过MLCK调节紧密连接，发挥对TNF-α诱导的Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。（4）Glycyrrhentinic Acid可以促进IEC-6损伤细胞增殖、降低凋亡率，通过上调HuR及下游基因EGF、EGFR、MEK的表达，维持肠道屏障稳态。