"人源性"乳腺微环境的靶点基因核糖体蛋白L32的作用机制研究

"Mammary microenvironment" plays an important role in the proliferation and metastasis of human breast cancer. However, widely used mouse models of breast cancer are not suitable for the in vivo research of "human" mammary microenvironment. In previous studies, we have built a novel mouse model with "human" mammary microenvironment. This model could mimic the clinical proliferation and metastasis of "human" breast cancer cells, which were regulated by "human" mammary microenvironment. We obtained the primary tumor mass for primary culture, and tested the primary cultured breast cancer cells by gene chips. Then we obtained some genes in "human" breast cancer cells targeted by "human" mammary microenvironment. We selected Ribosomal Protein L32 (RPL32) for further research. Preliminary data showed that temporary down-regulation of RPL32 could reduce the migration and invasion of "human" breast cancer cells. In this project, we plan to explore the roles and mechanisms of RPL32 in human breast cancer metastasis by in vitro, in vivo experiments and clinical investigations.

"乳腺微环境"在人类乳腺癌增殖和转移的过程中发挥着极其重要的作用。然而目前广泛使用的乳腺癌小鼠模型均不适用于"人源性"乳腺微环境的在体研究。 在前期研究中，申请人新建的具有"人源性"乳腺微环境的小鼠模型，能较好地模拟出"人源性"乳腺微环境调控"人源性"乳腺癌细胞增殖、并向远处"人源性"靶器官转移的临床现象。申请人对小鼠模型的原发灶瘤体进行原代培养后，获得了在"人源性"乳腺微环境中增殖的原代"人源性"乳腺癌细胞株。通过基因芯片技术，得到了"人源性"乳腺微环境调控"人源性"乳腺癌细胞的靶点基因谱。申请人从中选择了核糖体蛋白L32（Ribosomal Protein L32，RPL32）进行后续研究。结果发现，瞬时下调RPL32表达可降低乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。在本课题中，我们拟用体外实验、小鼠模型和临床标本检测的方法，研究RPL32在乳腺癌转移过程中的作用机制和临床意义。

【背景】组织微环境包括基质细胞（如成纤维细胞、免疫细胞、炎症细胞、血管细胞）和细胞因子等成分，以及由这些成分共同构成的三维空间结构。肿瘤细胞可分泌多种基质调节因子激活周围组织微环境中的基质细胞，分泌一些基质金属蛋白酶和细胞因子，逐步将周围“正常的”组织微环境改造成“肿瘤性”组织微环境，促进肿瘤细胞的增殖和转移。【研究内容】申请人成功建立了具有“人源性”乳腺微环境的“人乳腺-人乳腺”小鼠模型，收集乳腺癌原发灶瘤体进行原代培养和提纯后，送检基因表达谱检测。从中挑选核糖体蛋白L32（Ribosomal Protein L32，RPL32）进行研究。课题组通过慢病毒转染乳腺癌细胞株SUM1315，下调RPL32的表达，然后通过细胞学实验，分子生物学实验和动物实验，检测RPL32对乳腺癌细胞转移能力的影响。并在临床标本中检测RPL32的表达，评价RPL32的临床意义。【重要结果和关键数据】用带有绿色荧光蛋白（GFP）的质粒和空载稳定转染野生型人源性乳腺癌细胞株SUM1315，分别得到实验组和空载对照组细胞株。通过qPCR和western blot检测显示，实验组（1315-KOD）RPL32的表达量明显低于空载对照组（1315-CON）。划痕实验和Transwell实验（+/-基质胶）显示1315-KOD的迁移和侵袭能力明显下降。Western blot检测发现MMP-2/9下调。小鼠实验发现，1315-KOD组发生肺转移的能力明显低于对照组。临床标本检测发现，RPL32在癌组织中的表达明显高于癌旁。【结论】RPL32在乳腺癌转移的过程中具有较为重要的临床意义，可能为乳腺癌的治疗提供新的思路。