人源性乳腺微环境小鼠模型中新的EMT相关蛋白的发现与调节研究

上皮间质转化（EMT）与乳腺癌转移和耐药等重大问题密切相关。微环境在EMT发生和发展中起着关键的作用，目前的EMT研究缺乏具有合理微环境的自发性活体模型。本研究拟对通过具有人源性乳腺微环境的小鼠模型中乳腺癌细胞自发的EMT过程中得到的差异蛋白组进行深入的研究，发现和验证新的乳腺癌EMT相关蛋白。用分子克隆、RNA干扰和慢病毒转染等手段，通过以乳腺癌细胞株MCF7为基础的正向研究和以原代乳腺癌细胞株231br为基础的逆转研究，对经过前期严密甄选和初步验证目标蛋白与EMT的相关性进行确证，并阐述它们参与转化过程的作用途经和方式。.本研究是建立在人乳腺癌细胞株在具有人源性乳腺微环境的活体内自然发生的EMT过程上的。通过确证新的乳腺癌EMT相关蛋白以及阐述它们的作用途径。本研究可能会丰富乳腺癌EMT机制网络，甚至发现潜在的针对乳腺癌转移和耐药的预后因素及治疗的靶点。

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，是指上皮细胞通过特定程序转化为间质表型细胞的生物学过程，在生理和病理过程中发挥重要作用，近年发现其与乳腺癌转移密切相关。本研究团队前期建立的人源性乳腺微环境小鼠乳腺癌模型中，发现原代细胞与亲代细胞相比，EMT标志物发生改变。进一步通过蛋白质组分析在两种细胞中得到81种差异蛋白，其中埃兹蛋白（ezrin）和皮动蛋白（cortactin）发生显著的改变。本实验通过慢病毒转染MDA-MB-231和SUM-1315细胞系，成功下调细胞中ezrin的表达。Ezrin下调后，细胞迁移和侵袭能力降低，EMT标志物钙黏蛋白E（E-cadherin）表达增高，α-平滑肌动蛋白（α-SMA）表达降低，转录因子snail，slug，twist1，twist2部分发生下调改变，MDA-MB-231细胞形态由间质转变为上皮表型。伴随ezrin下调，cortactin表达增高，而cortactin并不能引起ezrin的改变，免疫共沉淀表明两种蛋白之间存在直接联系，乳腺癌组织芯片免疫组化研究发现ezrin低表达与cortactin高表达密切相关。目前研究发现ezrin通过下调cortactin表达促进乳腺癌发生EMT，ezrin和cortactin作为EMT通路中的关键蛋白，可能成为未来治疗乳腺癌的潜在靶点。