miRNA-30s在微小病变样IgAN中的致病机制和雷公藤多苷干预的分子机制

IgAN is the most common glomerulonephritis in China, and is not a homogeneous disease entity. Nephrotic syndrome (NS) is one of the most common clinical manifestations of IgAN, and about 45% IgAN patients with NS presented with minimal change known as IgAN with minimal change like lesions or IgA nephropathy with minimal change disease (MCD-IgAN). Chinese herb medicine TWHF (Tripterygium wilfordii Hook. F) is effective in several kinds glomerulonephritis by immunosuppressant and non- immunosuppressant. Triptolid, one of the major active components of TWH, could ameliorate various stimuli -mediated podocyte injuries in vivo and in vitro. All the members of mi-RNA30s of podocytes are downregulated and mediated podocyte injury in a variety of kidney diseases and pathogenic conditions. Glucocorticoid-sustained miRNA-30s expression associated with alleviated podocyte damage. We want to take miRNA-30s as the starting point in this study, intend to insight into pathogenic mechanism through mi-RNA30s expression, molecular in down stream and ultrastructure damage in renal tissue of MCD-IgAN, animal model and podocytes in culture under the conditon with or without triptolid in order to elucidate the molecular mechanisms in the pathogens of MCD-IgAN and the the efficiency of triptolid.

IgAN是我国最常见的是肾小球肾炎，为不均一的病变实体，肾病综合征（NS）是IgAN常见的临床表现，微小病变样(MCD)IgAN约占临床表现为NS的IgAN 45%。前期系列研究表明中药雷公藤多苷(TW)可以通过多种免疫/非免疫机制对伴NS的多种肾小球肾炎有效，其主要成份雷公藤甲素对多种情形下的足细胞具保护作用。在多种肾脏病变及致病情形下足细胞miRNA-30s表达均下调并介导足细胞损伤，糖皮质激素可以维持miRNA-30s表达，减轻足细胞损伤。本研究以miRNA-30s为切入点，拟从MCD-IgAN肾组织、体外细胞培养及动物模型足细胞miRNA-30s的表达及TW/雷公藤甲素干预后miRNA-30s及其相关分子、足细胞超微结构的变化，以阐明miRNA-30s在MCD-IgAN中的致病机制和TW干预的分子机制。

肾小球疾病是常见的肾脏病类型，而足细胞损伤在肾小球疾病发生发展中起重要作用甚至是始动因素。阐明足细胞损伤机制对肾小球疾病的防治具有重要意义。目前，已知多种信号通路参与足细胞损伤，包括TGF-β等。然而，这些信号通路是如何损伤足细胞的具体机制有待明确。既往研究还发现miR-30家族对足细胞结构和功能稳态具有重要作用，但它们在肾小球疾病发生过程中能被TGF-β信号下调，进而导致足细胞骨架损伤和细胞凋亡。雷公藤甲素（TP）是治疗肾小球疾病的临床用药，既往研究发现TP具有保护足细胞并逆转蛋白尿的作用，但是机制不详。本研究根据这些既往研究提出TP的保护机制是抑制TGF-beta诱导的miR-30表达下调。我们利用体外和体内实验对该假说进行验证，发现1）TP可以抑制TGF-β诱导的p38、p65和NFATC3分子的活化以及足细胞凋亡的发生，抑制TGF-β引起的足细胞骨架损伤； 2）TP可以完全逆转TGF-β诱导的miR-30s的表达下调； 3）既往研究表明TGF-β经由Smads通路下调miR-30s，我们发现TP能抑制TGF-β诱导的Smads磷酸化/活化, 提示TP是通过抑制Smads磷酸化而防止miR-30s的下调，从而对足细胞起保护作用；4）在分离的肾小球中，TP可以抑制TGF-β诱导的miR-30s的下调以及Smad2/3的磷酸化。这些结果表明TP是通过稳定miR-30s的表达而对足细胞起保护作用。此外，我们还针对TP的毒性作用进行研究，发现TP对体外培养的足细胞具有很强的毒性，10 ng/ml即可诱导骨架损伤和细胞凋亡，这对临床用药的安全性提出了挑战。于是，我们利用小鼠进行了研究，发现即使在接近致死剂量的TP处理一个月，小鼠并未出现任何足细胞损伤和蛋白尿，证明TP在活体足细胞没有毒性；同样，TP对分离的小鼠肾小球也没有毒性，这提示永生化足细胞系在建株过程中发现变异，导致对雷公藤的敏感。以上研究的意义在于不仅阐明了TP对足细胞保护作用的机制，同时证明，TP对活体足细胞的没有毒性，临床应用上无需考虑高剂量对足细胞起相反作用；最后，由于既往研究发现糖皮质激素是通过防止足细胞miR-30表达下调从而保护足细胞和逆转蛋白尿，因此，TP的功效和机制与糖皮质激素一样，使用TP能避免激素带来的诸多副作用。我们还研究了多种重要肾脏病的病理及临床特征，为改善它们的诊断和治疗提供了依据。