PPARγ在雷公藤内酯醇(T10)对阿尔茨海默病多靶细胞干预机制中的作用研究

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disease and the leading cause of the dementia. The etiology and pathogenesis of AD still not have been clearly discovered as yet. Also, there is no effective therapeutic strategy on AD. The project aims to study whether triptolide (T10), a natural compound extracted from Tripterygium wilfordii Hook.f.(TWHF), has protective and therapeutic effects on AD model and could inhibit beta-amyloid production, attenuate proinflammatory factors generation by regulating the expression and the transcriptional activation of PPARγ. Firstly, a cell line overexpressing APP，which is characterized by continuely producing beta-amyloid and act as a useful cellular tool to detect APP processing and its mechanisms, and primary neurons from homogenetic APP/PS1 transgenic mice will be used to test whether T10 influence APP processing, expression and activity of BACE1 and PPARγ by the methods of immunohistochemistry and molecular biological technology. To further study whether the mechanism of decrease in proinflammatory factors generation caused by triptolide treatment is dependent on PPARγ expression, some molecular biological experiments will be performed on primary microglia and astrocytes. The study may help researchers determine whether triptolide and its structure-activity analogs could be lead compounds utilized in therapeutic strategy for AD.

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群常见的神经变性病。其发病机制不清，尚无长期有效的治疗措施。本项目旨在研究具有自主知识产权的天然药物单体雷公藤内酯醇(T10)抑制神经元β-淀粉样蛋白(Aβ)产生和胶质细胞炎症因子释放的多靶细胞机制是否由PPARγ介导，及其与T10防治AD作用的相关性。本研究拟利用稳定表达Aβ前体蛋白APP的细胞系和过表达APP的原代神经元，观察T10对PPARγ表达及活性的调控和APP代谢及Aβ产生的影响，以明确T10对PPARγ的调控作用与Aβ产生的关系。同时，在原代培养的小胶质细胞和星形胶质细胞，研究T10对Aβ引起的炎症因子释放和对PPARγ的调控作用，以明确PPARγ在T10抑制胶质细胞炎症因子生成过程中的作用。期望通过本项目的研究，为与T10类似的一些先导化合物的开发和临床应用及PPARγ这一老靶点的新用途提供理论依据。

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群常见的神经变性病。其发病机制不清，尚无长期有效的治疗措施。本项目研究了具有自主知识产权的天然药物单体雷公藤内酯醇(triptolide, T10)抑制神经元β-淀粉样蛋白(Aβ)产生和胶质细胞炎症因子释放的多靶细胞保护作用及其分子机制与PPARγ活化的相关性。.本研究首先利用稳定表达APP的HEK293细胞系，观察T10对Aβ产生和BACE1蛋白表达以及mRNA水平的影响，结果显示T10抑制HEK293-APPswe细胞Aβ1-40、Aβ1-42的生成和BACE1蛋白的表达，但是不影响HEK293-APPswe细胞中BACE1的mRNA水平；进一步利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测BACE1基因启动子活性，发现T10对BACE1基因的启动子活性也无明显影响。上述结果说明，T10通过抑制BACE1表达减少Aβ产生，但是T10对BACE1蛋白表达的抑制作用不是发生在转录水平，应该是通过转录后调控实现的。PPARγ特异性阻断剂GW9662对T10抑制Aβ分泌的影响不明显，进一步说明T10不是通过调控PPARγ抑制BACE1的表达，进而抑制Aβ分泌的。在原代培养的星形胶质细胞，我们发现T10可以抑制LPS活化星形胶质细胞引起的NO和炎症因子TNFα，IL-1β的生成，但是PPARγ阻断剂GW9662不能影响T10的上述作用，说明T10抑制LPS引起的星形胶质细胞炎症因子释放的作用不依赖于PPARγ的活化。.综上所述，PPARγ并未参与T10多靶细胞调控Aβ产生和炎症因子生成过程。本课题还对T10的低毒高效衍生物(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(LLDT-8，(5R)-5-hydroxytriptolide)在LPS活化的胶质细胞炎症因子释放过程中的作用及相关机制进行了研究。首次发现LLDT-8能够抑制LPS引起的原代培养的星形胶质细胞活化以及后续的NO、TNF-α和IL-1β等毒性分子释放增多，其分子机制是通过减少IκB-α的磷酸化和降解进而抑制NF-κB/p65的核转位和DNA结合活性来实现的。