雷公藤多苷对银屑病血管生成的作用及其分子机制研究

Angiogenesis is a critical step of psoriasis pathogenesis. Tripterygium Glycosides has been demonstrated to have anti-angiogenesis activities in keratinocytes by inhibiting the expressing of VEGF and PDGF; in leukocytes by suppressing the expressing of ICAM-1 and VCAM-1. Further, our previous studies indicated that Tripterygium Glycosides-induced anti-angiogenesis of endothelial cells might play a crucial role in treatment of psoriasis vulgaris, and the microvessel density (MVD) was significantly decreased after oral Tripterygium Glycosides. These results reveal the potential cytological and molecular basis for the Tripterygium Glycosides-induced inhibitor effect of neovascularization. However, studies about the effects of Tripterygium Glycosides on the angiogenesis of vascular endothelial cells have not been reported, nor have potential mechanisms been elucidated. The project intends to carry out in vivo studies by collecting tissues and peripheral blood of patients on the effects of Tripterygium Glycosides on the angiogenesis-related factor; the gene expression profile was analyzed by an oligonucleotide probe-based gene array chip and validated by qRT-PCR and wester blot; further investigate the effects of Tripterygium Glycosides on the angiogenesis of human endothelial cells and the receptor tyrosine kinase pathway involved. The results would provide a new light on the mechanism by which Tripterygium Glycosides effect the blood vessels.

血管生成是银屑病发生、发展过程中的关键。近期研究表明小鼠银屑病模型中雷公藤多苷可以抑制角质形成细胞VEGF的表达；体外白细胞培养细胞中降低内皮细胞黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达；本研究组前期研究表明，雷公藤多苷降低患者的微血管密度，结果提示雷公藤多苷可能通过改变血管生成相关性细胞因子的表达发挥抑制血管生成作用。然而关于雷公藤多苷对银屑病血管生成作用的系统研究尚未见报道。本项目拟应用寻常型银屑病患者的皮损组织和外周血样本研究雷公藤多苷对血管生成相关因子表达的影响；应用基因芯片分析雷公藤多苷对人血管内皮细胞的全基因组表达改变，应用实时定量PCR和免疫印迹验证并筛选显著差异表达的细胞因子和信号通路关键分子；应用Matrigel体外成管模型研究酪氨酸激酶受体途径在雷公藤多苷血管生成效应中的作用。本研究将为阐明雷公藤多苷对血管内皮效应的作用机制提供新依据。

血管生成是银屑病患者的早期病理表现之一，是银屑病发生、发展过程中的关键。研究发现银屑病皮损新生血管生成为表皮角质形成细胞过度增生提供营养支持，同时炎症细胞通过高通透性的血管内皮进入病变组织，银屑病病理变化的始动因素是病理性血管生成。本项目分别应用免疫组化 ABC 法和双抗体夹心 ELISA 法，成功地检测进展期寻常型银屑病患者组织中和患者血清中血管生成相关性细胞因子VEGF、MCP-1、FLT-1/VEGFR-1、KDR/VEGFR-2表达特征，并成功地检测雷公藤多苷治疗前后上述细胞因子表达的作用特征及规律，结果提示银屑病进展期上述血管生成相关因子的高表达参与疾病的发生发展。进一步研究发现雷公藤多苷治疗后对银屑病患者皮损部位微血管密度的作用，从而揭示体内雷公藤多苷对银屑病患者血管生成相关性细胞因子表达的抑制规律。体外研究了雷公藤多苷对人血管内皮细胞（ECs）培养上清的VEGF、MCP-1、FLT-1/VEGFR-1、KDR/VEGFR-2表达的影响，并应用Matrigel 体外成管试验，进一步分析雷公藤多苷对人ECs体外成管能力的影响。体外雷公藤多苷对血管内皮细胞成血管能力的影响及分子机制研究，结果显示雷公藤多苷显著改变了人内皮细胞基因表达谱，其中血管生成相关基因低表达起重要作用，雷公藤多苷可能通过下调VEGF、MCP-1、FLT-1/VEGFR-1、KDR/VEGFR-2的mRNAs表达水平发挥血管生成抑制效应。生物信息学分析发现雷公藤多苷作用细胞表达改变的mRNAs参与调节创伤愈合相关血管生成，差异表达基因包括GPX1，HPSE，PRCP；参与调节血管新生出芽，表水平改变的基因有CCBE1，ENG，ITGB1，ITGB1BP1，PARVA，THBS1；参与调节白细胞与血管内皮细胞粘附，差异表达基因包括ITGB1，PODXL2，SELPLG，ICAM1，PTAFR；参与调节血管平滑肌细胞发生，差异表达基因包括ENG和SGCB。本项目研究结果揭示了雷公藤多苷抑制银屑病发生发展过程中的血管生成的细胞学基础，为解释雷公藤多苷引起血管生成抑制作用的分子机理提供了新证据，为寻常型银屑病特别是进展期的防治提供了新思路。