炎性复合体在原发免疫性血小板减少症发病中的作用和机制研究

Primary immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune hemorrhagic disease. The current studies of the pathogenesis leading to thrombocytopenia are mainly focused on the adaptive immune system. As important regulatory molecules between innate and adaptive immunity, inflammasomes were critically involved in the pathogenesis of autoimmune diseases. Our previous study showed increased activation of inflammasome and secretion of IL-1β in monocytes, suggesting the possible correlation between inflammasomes and ITP. In this project, we speculate that inflammasomes may participate in the pathogenesis of ITP. To test this hypothesis, we intend to screen the inflammasomes molecules that are differentially expressed between ITP patients and healthy controls through in-vitro studies. Using RNA interfering and overexpression, we plan to investigate the effects of inflammasomes on monocyte/macrophages, dendritic cells and megakaryocytes as well as the underlying molecular mechanism through in-vitro cell culture systems, and verify the effect of inflammasomes on the pathogenesis of ITP in murine models. Our investigation will shed light on the roles of the inflammasomes in ITP.

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种自身免疫性出血性疾病。既往关于ITP发病机制的研究以适应性免疫功能紊乱为主。作为调控固有免疫和适应性免疫的关键关联分子，炎性复合体在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。课题组前期研究发现ITP患者外周血单核细胞炎性复合体活性明显增强，IL-1β释放增加，提示我们炎性复合体可能与ITP发病密切相关。在本课题中我们提出炎性复合体参与ITP发病这一假说，拟以炎性复合体为切入点，体外实验筛选ITP患者差异表达的目标炎性复合体分子；通过体外细胞培养体系，从过表达及干扰两个方面,研究干预目标炎性复合体分子对单核/巨噬细胞、树突状细胞、巨核细胞等功能的影响及其分子机制；通过动物模型进行在体实验，验证封闭目标炎性复合体分子对ITP发病的影响，探索炎性复合体在ITP发病中的作用及机制，为ITP的临床诊疗提供新思路。

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种自身免疫性出血性疾病。既往关于ITP发病机制的研究以适应性免疫功能紊乱为主。作为调控固有免疫和适应性免疫的关键关联分子，炎性复合体在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。在本课题中我们拟探索炎性复合体在ITP发病中的作用及机制，为ITP的临床诊疗提供新思路。. 1. 炎性复合体和炎性相关基因多态性与ITP相关性分析。. TNFAIP3 rs10499194 位点突变后对降低ITP发病率有统计学意义，与CC基因型的患者相比，CT基因型和CT/TT基因型的患者TNFAIP3表达量显著提高。此外，TNFAIP3 rs10499194 位点与糖皮质激素治疗的敏感性相关。. 2.姜黄素抑制NLRP3炎性复合体的机制研究。. 姜黄素能够抑制NLRP3炎性复合体。进一步证实其作用机制为：姜黄素促进NLRP3炎性复合体活化时乙酰化微管蛋白的聚积，不影响SIRT2表达，抑制组蛋白的去乙酰化不影响NLRP3炎性复合体活化。姜黄素能够减少核周围ASC的寡聚化和斑点形成。. 3. ITP患者炎性复合体分子和相关细胞因子研究。. 我们发现在ITP发病过程中，炎症密切相关的细胞因子IL-1β是降低的，经激素治疗后得以部分恢复，并且实验初步筛选出ITP相关的天然免疫识别受体及炎性小体分子NLRP1、NLRP3等。. 4.敲低或过表达NLRP3对ITP患者树突状细胞及巨噬细胞功能的影响。. NLRP3表达降低后，单核细胞来源的树突细胞炎症小体活性降低，炎症因子IL-1β、caspase-1表达减少；并且树突状细胞向耐受性DC转变；NLRP3敲低后，巨噬细胞表面Fc活化性受体FcγRI、IIa表达降低，而抑制性受体IIb表达增加，其诱导单核/巨吞噬细胞的吞噬能力得到削弱；过表达NLRP3使ITP患者外周血单个核细胞诱导来源的树突状细胞NLRP3炎症小体活性上升，分泌IL-1β增强。. 5.干扰或过表达NLRP3对巨核系造血及血小板生成的影响。. 阻断或过表达NLRP3使造血干细胞来源的巨核细胞内炎症小体活性改变；焦亡相关指标在过表达NLRP3组显著上调，其余两组未见明显差异；血小板产生在阻断NLRP3组略有增加，在过表达NLRP3组显著减少。