去唾液酸化在原发免疫性血小板减少症发病中的作用和机制研究

Primary immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune abnormality- conducted thrombocytopenic syndrome. Desialylation has been proven to be an essential approach in platelet destruction. Our previous investigation prompted a significantly up-regulation in platelet surface glycoprotein desialylation level accompanied by increase of serum sialidase concentration and activity. Sialidase inhibitor, such as Oseltamivir and DANA, shows potential therapeutic value to ITP. All above indicates that desialylation-mediated platelet destruction is probably involved in ITP pathogenesis. Cytotoxic CD8+ T cell-mediated platelet lysis attributes to thrombocytopenia in ITP, though it is argued that the minor CD8+ T cell subset could not account for the numerous platelet destruction. Hereby we propose that platelet lysis mediated by CD8+ T cell would release sialidase residing in granules within platelet and desialyte circulating platelet that finally destroyed in liver. This research aims at demonstrating the roles and mechanisms of desialylation in ITP pathogenesis, and discovering the potential therapeutic value to specifically blockade platelet desialylation.

原发免疫性血小板减少症（ITP）是一种自身免疫功能异常导致的血小板减少综合征。去唾液酸化是血小板破坏的重要途径，我们在前期研究中发现ITP患者血小板去唾液酸化水平显著升高，伴有血清唾液酸酶浓度和活性增加，唾液酸酶抑制剂表现出对ITP的治疗价值，提示去唾液酸化介导的血小板破坏有可能在ITP的发病中起到重要作用。CD8+T细胞可直接杀伤血小板，但其相对较少的数量可能不足以解释ITP中大量血小板破坏。我们推测CD8+T细胞介导的血小板破坏可能引起血小板内唾液酸酶释放，催化外周血小板去唾液酸化进而在肝内破坏。本研究拟通过体外细胞培养和主动型ITP小鼠模型，从细胞和分子水平揭示去唾液酸化在ITP发病中的作用以及机制，并探索特异性阻断去唾液酸化对ITP可能具有的治疗价值，为临床诊疗提供新的思路。

原发免疫性血小板减少症（ITP）是以外周血中血小板数目减少为主要特点的临床常见出血性疾病，目前观点认为CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTLs）介导的血小板直接裂解为ITP中血小板破坏的重要机制，但CTLs数量相对较少，可能不足以解释ITP 中大量的血小板破坏。近年来发现，去唾液酸化是血小板破坏的重要途径，一些可以造成血小板损伤的因素可以引起血小板内唾液酸酶转位，进而导致血小板去唾液酸化水平增加。我们推测ITP中CTLs可能引起血小板内唾液酸酶转位，催化外周血小板去唾液酸化，进而导致血小板在肝脏内被破坏。本研究进行了体外实验和小鼠模型体内实验，结果发现，ITP患者血小板去唾液酸化水平显著高于正常对照，经治疗后缓解的ITP患者血小板去唾液酸化水平较前降低；ITP患者外周血CTLs诱导的血小板裂解和凋亡明显高于正常对照，根据CTLs的杀伤能力，我们将ITP患者分为杀伤组和无杀伤组，杀伤组ITP患者血小板去唾液酸化水平明显高于无杀伤组；杀伤组ITP患者CTLs在体外可诱导血小板去唾液酸化水平升高及血小板内唾液酸酶转位至血小板表面，唾液酸酶抑制剂DANA可显著降低与CTLs共培养的血小板去唾液酸化水平；此外我们还通过ITP小鼠模型进行了体内实验，CD61敲除鼠经过野生小鼠血小板免疫后，产生了抗原特异性CTLs，我们将免疫过的CD61敲除鼠的CD8+脾细胞同野生小鼠血小板共同孵育，孵育后血小板的去唾液酸化水平明显升高，分离血小板回输至野生小鼠体内，回输的血小板在肝脏中的破坏显著增多；在体外共孵育过程加入DANA，可显著减少血小板回输至小鼠体内后在肝脏中被吞噬。故而我们得出结论，ITP中CTLs除可直接裂解血小板以外，还可进一步引起血小板去唾液酸化水平升高，进而导致血小板在肝脏中被吞噬，抑制唾液酸酶活性可有效减少CTLs引起的血小板在肝脏中的破坏。我们的研究提示，抑制血小板去唾液酸化可能对ITP的治疗有益，为ITP的治疗提供新的临床选择。