傣药龙血竭调制河豚毒素不敏感型钠通道和辣椒素受体的药效物质多靶点镇痛的药理研究

Dragon's Blood is a kind of Dai Medicine with good analgesic effect. The previous patch clamp experimental results showed that it could modulate tetrodotoxin-resistant (TTX-R) sodium currents and capsaicin-induced transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) responses which all showed relativity with pain sensitivity through the effective combination composed of its three components, namely cochinchinenin A, cochinchinenin B and loureirin B. In order to confirm whether the material basis for the modulation of Dragon's Blood on nociceptive transmission was the combination composed of the three components and make further pharmacokinetic/pharmacodynamics （pK/pD）research on its multi-target analgesic effects, the following works were planned to complete in this study: (1) Based on receptor theory, the action mode and the synergistic interaction mechanism of the three components on TTX-R sodium channels and TRPV1 receptor would be discriminated by using patch clamp technique and mathematical analysis; (2) In rat models of neuropathic and inflammatory pain, pK/pD parameters of various combinations composed of the above three components against pain response induced by mechanical stimulation and thermostimulation would be investigated; (3) All these results may provide a reasonable basis to determine the optimal compatibility proportion of the three components, which was also planned to be tested by the in vivo positive control experiments for the evaluation of the analgesia effects.

傣药龙血竭具有良好的镇痛活性。膜片钳实验结果表明，其可通过3种成分剑叶龙血素A 、剑叶龙血素B、龙血素B的有效组合以协同相互作用的方式调制与痛觉关系密切的河豚毒素不敏感型钠通道和辣椒素受体，干预痛觉信息传导，从而产生镇痛效应。为了在此基础上，进一步确证龙血竭调控痛觉信息传导的药效物质是否为这3种成分的组合，并对其多靶点镇痛的药动学与药效学进行深入的药理研究，拟以药理学受体理论为基础，应用膜片钳实验技术和数学建模方法，探讨上述3种成分调制河豚毒素不敏感型钠通道和辣椒素受体的作用方式和3种成分联用时产生协同相互作用的机制；在炎性痛和神经性痛大鼠模型上，进行3种成分及其组合在不同给药方式下对机械或热刺激引起的痛反应或痛敏作用镇痛效应的pK/pD研究；以上述结果为依据，优化3种成分组合，并通过在体动物实验，以阳性药为对照，评价其镇痛效应，评估其相互作用性质，最终确定3种成分镇痛的最佳组合方式。

为进一步确证龙血竭调控痛觉信息传导，产生镇痛效应的药效物质是否为剑叶龙血素A 、剑 叶龙血素B、龙血素B3种黄酮类成分的组合，并对其多靶点镇痛的药理机制进行深入研究， 对3种成分调制河豚毒素不敏感型钠通道和辣椒素受体的作用方式、分子机制从分子、细胞和整体水平上进行了一系列药理研究。研究发现剑叶龙血素A和剑叶龙血素B与河豚毒素不敏感型钠通道的作用方式分别符合受体占位学说和速率学说，龙血素B对河豚毒素不敏感型钠电流的抑制效应随给药时间的延长逐渐增加，但其与通道的作用方式却不符合受体占位学说。龙血素B对河豚毒素不敏感型钠通道的调制效应与辣椒素受体无关，但其调制河豚毒素不敏感型钠通道的部分机制却和辣椒素相似。辣椒素通过激活辣椒素受体上调胞内第二信使环磷酸腺苷，抑制河豚毒素不敏感型钠通道。龙血素B虽然拮抗辣椒素受体，但却能激活腺苷酸环化酶，导致环磷酸腺苷上调，抑制河豚毒素不敏感型钠通道。这一结果也解释了龙血素B虽然拮抗辣椒素受体，却能使细胞内钙缓慢上升的矛盾现象。在进行3种成分及其组合在体镇痛效应观察的实验中，发现3种成分及其组合对正常大鼠的热刺激引起的痛反应没有镇痛效应，但对完全弗氏佐剂诱导的炎性痛大鼠的热刺激引起的痛反应具有良好的镇痛效应。说明3种成分及其组合能够特异性减轻炎性痛反应，其抑制河豚毒素不敏感型钠通道和辣椒素受体，干预痛觉信息传导可能需要炎性介质的参与。观察3种成分及其组合对酸敏感通道的调制效应时发现，3种成分的组合能够协同抑制酸敏感通道，这一结果与其协同减轻完全弗氏佐剂诱导的炎性痛大鼠的热刺激引起的痛反应，完全一致。上述结果表明，龙血竭3种成分以不同的作用方式抑制河豚毒素不敏感型钠通道，从而产生了协同效应。龙血竭3种成分的组合能够特异性地减轻炎性痛反应，应该是在体内pH值增加，炎性介质参与的情况下，首先抑制了酸敏感通道，继而抑制辣椒素受体和河豚毒素不敏感型钠通道，从而阻断痛觉信息传导，产生镇痛效应。但其抑制酸酸敏感通道和辣椒素受体的机制仍有待进一步研究。