基于雌激素/受体靶点效应与差异代谢通路网络相关联的逍遥丸归肝经生物学基础研究

As a key part of Traditional Chinese Medicine meridian theory, the biological basis of liver meridian is still unclear. Our earlier multiterm studys found that the function of liver – kidney - brain system are related to the key target - estrogen receptor (ER). Thus, a new study of liver meridian basis based on metabolism and ER networks regular was proposed in this foundation, which was conformed to the basic theory of Traditional Chinese Medicine. In this reseach, the essence of liver meridian of traditional formular XiaoYao Pills with perimenopausal liver-qi stagnation syndrome rats are evaluated by metabolism, multiple components pharmacokinetic study, main function of liver function, and expression of ERα and ERβ in liver-kidney-brain system. The project will provide technical support and experimental accumulation for exploring biological basis of liver meridian theory of XiaoYao Pills.

归肝经理论是祖国医学药性理论的重要组成部分，但其生物学本质尚不清楚。现代研究表明归肝经中药通过雌激素样作用参与神经—内分泌—受体网络，调控肝—肾—脑生理功能的多个环节，为此我们在符合中医“整体观”原则的基础上，提出“归肝经与靶器官雌激素/受体（ER）相关联”的假说。前期工作已证实经典归肝经方剂逍遥丸的雌激素样作用，本项目将其用于典型肝郁证模型，以“方剂-活性组分-靶器官（ER）-差异性生物标示物”为主线，通过多组分药代动力学表征逍遥丸全成分的体内分布，检测靶器官ERα、ERβ表达，评价肝主藏血、主疏泄功能主要药效学指标；在此基础上，利用代谢组学表征逍遥丸作用前后的差异代谢物，构建其效应代谢通路网络并挖掘其生理意义，全面解释归肝经的生物学本质。本研究将初步阐释中药归肝经的科学内涵，为方剂归经理论研究提供新思路。

为解释归肝经理论的生物学本质，本课题将归肝经与靶器官雌激素/受体（ER）相关联，以归肝经经方逍遥丸为例，以典型肝郁证为动物模型，以“方剂-活性组分-靶器官（ER）-差异性生物标示物”为主线，通过多组分药代动力学表征逍遥丸全成分的体内分布、检测靶器官ERα、ERβ表达、评价肝主疏泄功能主要药效学指标，从而解释了逍遥丸归肝经的生物学本质。. 1. 在前期实验和文献调研基础上，确定了芍药内酯苷等14个成分为逍遥丸的代表性活性成分，并以这14个成分为指标，进行逍遥丸的药代动力学研究和体内分布研究。14个分析物均可在子宫和卵巢中测得，其中槲皮素和藁本内酯在子宫和卵巢中含量较高；其中12个成分（去除甘草苷和异甘草素）主要分布于在肝脏和肾脏；洋川芎内酯等内酯类化合物可以通过血脑屏障进入脑组织。.逍遥丸的组织分布结果表明，逍遥丸口服后主要分布于肝脏、肾脏、胃肠和雌激素靶器官，进一步印证了逍遥丸主要归肝经、肾经，这种作用的趋向性很可能与雌激素为选择性作用靶点。 . 2. 逍遥丸的主要功效为疏肝健脾，养血调经，虽然其药效广泛，但是以归肝经主疏泄为核心，将逍遥丸对肝功能、雌激素靶器官和学习记忆器官的生化指标的影响进行比较。结果显示，给药逍遥丸提取物4周后，以上指标均有明显改善，说明逍遥丸在改善肝功能等方面具有显著作用。. 3. Western Blot法比较了逍遥丸对靶器官雌激素受体ER 表达的影响。口服给药逍遥丸提取物围绝经期综合征复合肝郁证模型大鼠的海马、大脑皮层、子宫、卵巢、肝组织的ERα和ERβ蛋白表达均得到显著上调。说明逍遥丸是通过调节雌激素受体发挥作用的，雌激素受体通路是逍遥丸归肝经的作用途径和物质基础。归肝经方药与雌激素受体靶点的相关性再一次得到证实。雌激素受体广泛存在于多种脏器组织中，是归肝经方药发挥“主疏泄”的潜在靶向受体。.综上所述，肝脏、肾脏、子宫、卵巢为归肝经方药逍遥丸的主要作用靶点，体内广泛存在的雌激素受体为归肝经药物发挥作用的主要通路，证实了“归肝经与靶器官雌激素/受体（ER）相关联”的假说，初步解释了逍遥丸与雌激素相关联的归肝经生物学本质。