基于雌激素调控网络靶点探讨补肾方药归肾经的生物学基础

Our earlier multiterm studys found that the function of the kidney meridian formulas are related to the key target - estrogen receptor (estrogen receptor, ER) in estrogen regulatory networks, whereas the role of the active ingredient of the kidney meridian and the biological basis of ER are still unknown. Based on this, according to the proposition of the correlation between kindney- meridian and the reproductive - endocrine - skeletal system network, along the idea of the traditional Chinese medicine / active ingredient - Meridian - target organ - receptor - target genes, ER +/- tools cells are used to rapid screening the estrogenic activity of the single herbs and ingredient in Qingyanwan (QYW). The pharmacodynamic characterization of all and the part of formula are evaluated. The ERs binding are detected by Moe-docking and ELISA technique and the molecular mechanisms of ER pathway are explored. The biological basis of related ER pathway is studied by Genome-wide chip and Network pharmacology technology. Identification of the material basis of QYW for the kidney meridian, further explore the ER and the relevance of the kidney meridian of the TCM and related features. Explore the cited role of Green salt and its compatibility mechanism. The project will provide technical support and experimental accumulation for exploring biological basis of Kidney meridian.

前期多项研究已证实归肾经方药发挥功效与雌激素调控网络中的关键靶点—雌激素受体（estrogen receptor, ER）相关，但其归肾经的物质基础及深入的ER生物学机制尚不清楚。为此按照“归肾经与生殖-内分泌-骨骼系统网络的相关性”的命题，沿着“方药/活性成分-归经-靶器官-受体-靶基因”的思路，以补肾温阳的青盐丸为载体，工具细胞联合实验动物活性开展方药及成分快速筛选；拆方进行生殖-内分泌-骨骼系统的药效评价；高通量的Moe-docking 分子对接联合酶免技术检测活性成分与ER结合和ER通路分子机制研究；全基因组表达谱芯片联合网络药理学研究策略及实验验证ER通路相关生物学机制。辨识其归肾经的物质基础，进一步探讨ER与中药归肾经的相关性和关联特征，同时解析青盐引经报使的作用探讨其配伍机制。该项目的实施将为科学揭示中医归肾经的生物学基础提供技术支撑，为中药归肾经的科学内涵提供实验积累。

前期研究已证实归肾经方药发挥功效与雌激素调控网络中的关键靶点—雌激素受体（estrogen receptor, ER）相关，但其归肾经的物质基础及深入的ER生物学机制尚不清楚。为此按照“归肾经与生殖-内分泌-骨骼系统网络的相关性”的命题，沿着“方药/活性成分-归经-靶器官-受体-靶基因”的思路，以补肾温阳的青盐丸为载体，采用低雌激素实验动物进行生殖-内分泌-骨骼系统的药效评价及机制研究；Moe-docking 分子对接联合酶免技术检测活性成分与ER结合和ER通路分子机制研究；采用ER +/-细胞来辨识其归肾经的物质基础，并探讨ER与中药归肾经的相关性和关联特征，同时采用网络药理学结合药效学结果解析青盐引经报使的作用探讨其配伍机制。研究发现青盐方（QYFE）归肾经药效表征为对未成熟小鼠生殖系统的雌激素样作用，拮抗卵巢大鼠生殖靶器官的萎缩、防治去卵巢大鼠的焦虑及骨质疏松作用。其归肾经作用的生物学基础之一为其与ER具有高度的选择性和亲和性：QYFE的雌激素样作用机制与增加循环中的雌激素水平，上调靶器官ER表达相关； 体外研究表明一定浓度范围的QYFE可以ER结合，通过经典的ER-ERE信号通路发挥作用，并上调ER蛋白及下游相关基因PS2、PR的表达；QYFE预防OVX后雌激素缺乏所致的骨质流失机制与通过ER途径促进成骨细胞增殖，提高单位蛋白ALP活性，激活ER依赖性的MEK/ERK和PI3K/Akt通路相关； QYFE通过下调ER依赖性的p-ERK蛋白的表达，降低破骨细胞形成数量，抑制破骨细胞生成发挥抑制骨丢失的作用。车叶草苷、 肉苁蓉苷F、蜕皮甾酮与ERs结合能力较强，是其雌激素样作用活性成分，益母草苷、尿囊素、去乙酰基车叶草苷酸具有抗骨丢失作用，上述成分为其归肾经的物质基础。使药青盐可增加BDNF、OXTR等18个作用于围绝经期综合征靶点，分别作用于关键病理环节雌激素低下和围绝经期焦虑、生殖道萎缩和骨质疏松。增加君臣佐药组在各个不同症状和关键病理环节的参与防治，是其引经报使的可能机制。该研究得出E2-ER动态调控网络是归肾经的生物学基础之一，该研究为中药归肾经的科学内涵提供实验支撑。