乙肝患者血清蛋白的成分变化分析及其作为生物标记对Th17/Treg细胞的影响研究

乙型肝炎严重危害人类健康，但其发病机理，尤其是其向肝衰竭发展的机制不明了，难以预测病情进展与预后，尚无特效治疗方法。为寻找能够准确判断、预测乙肝病情发展与预后的"生物标记(biomarker)"，我们采用iTRAQ、western blot等技术，鉴定乙肝导致肝功能轻度损伤直至肝功能衰竭的过程中，人类血清蛋白成分的动态变化（我们的前期研究已经发现：乙肝病情的进展与患者血清蛋白成分的动态变化密切相关，并已对部分蛋白成分进行了iTRAQ鉴定及western blot的初步验证，得到肯定结论），通过大样本临床验证其作为biomarker判断乙肝病情发展方向的可能性；并通过调控其表达，研究其对乙肝患者Th17/Treg免疫细胞的影响。以期通过本研究，首次确定可以预测乙肝病情发展及转归、预后的biomarker，明确其免疫机制，为乙型肝炎提供具有重大临床指导意义的"预警信号"和发病机制的研究基础。

本课题研究自2012年1月1日开始，2014年12月31日结束，完成课题任务并达到预期目标。我们采用iTRAQ、western blot 等技术，在正常人、慢性乙肝患者、乙肝慢加急性肝衰竭（HBV-ACLF）患者的血清中，发现了16种表达差异在1.5倍以上的蛋白质成分，我们选择了5种表达差异最显著的蛋白质成分进行western blot的验证，其结果均与iTRAQ检测一致。其中“apolipoprotein J precursor”、“platelet factor 4 precursor”、“Vitronectin”这3种蛋白质成分，随着病情的逐渐加重，表达水平“同步”逐渐下降，将是下一步作为判读乙肝病情进展与预后的“biomarker”的“候选蛋白”，我们将进一步进行大样本的临床验证以证实之，并进行后续研究，如“申请相关专利并发展检测试剂盒及相关技术”等。同时，我们发现：HBV-ACLF患者Th17/Treg免疫轴存在失衡，其Th17/Treg免疫失衡发生在疾病的恢复期，具体表现为Th17细胞比例上升同时伴随着Treg细胞比例下降，同时发现调节Th17/Treg免疫轴的多种重要影响因子，如IL-6/IL-1β/TGF-β及IL-10等因子表达水平存在不同程度的改变，结合临床数据分析发现Th17/Treg免疫失衡与乙肝病毒清除相关。我们将进一步把“慢乙肝患者血清的蛋白成分分析”与“慢乙肝患者血清的免疫指标变化”的目前研究结果结合起来，进行相关性研究，包括机体免疫状态与血清蛋白表达的关系，及其可能机制。.我们还对正常人和HBV-ACLF患者的肝脏组织进行了iTRAQ的蛋白检测分析，发现了57种表达差异在1.5倍以上的蛋白质成分，其中4种将是将来研究的重点；我们还将慢性乙肝的“蛋白机制”研究与“遗传机制”研究结合起来，贯彻“从基因到蛋白”的思路，利用外显子测序等技术，对1899位慢性乙肝患者和1828位健康人进行了“钠离子牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）”变异的研究，进一步证实了“NTCP”是“HBV”的肝细胞受体，并发现我国南方人群中普遍存在的这一受体的变异基因：“p.Ser267Phe”，具有使携带者有更强的抵抗乙肝病毒感染的作用。.整个课题研究过程中，本基金资助5篇研究论文，均为SCI收录，其中已发表3篇，已接收待发表2篇；指导博士研究生2名。