孕期雌、孕激素对戊型肝炎病毒复制的影响及其机制研究

For most people, hepatitis E infection may be self-limited. However, HEV replicates robustly in pregnant women and pregnant women are prone to developing fulminant hepatitis after HEV infection. The mortality of HEV infected pregnant woman is as high as up to 21%. Our preliminary data have showed successful transfection of PLC/PRF/5 cell line with HEV in vitro. We would like to investigate the role of E/P in HEV replication in this project. We propose that overactivation of E/P medicated signal pathways, such as MAPK/ERK, are crucial for HEV replication in pregnant woman. Our specific aims are 1: Establish the role of E/P in HEV replication with HEV tranfected cell line. 2: Investigate activation of MAPK/ERK signal pathway by E/P application, and the cross talk between activation of MAPK/ERK signal pathway and HEV replication. 3. Exam the effect of E/P recpetor antagnosit and MAPK/ERK inhibitor on HEV replication. Our work will further our understanding of pathophysiological process in maternal hepatitis E, especially the mechanisms of estrogen and progestogen in HEV replication. We believe these are novel studies that provide insight into therapeutic opportunities for sever hepatitis E in pregnant women.

普通人感染戊型肝炎病毒后病程常呈自限性经过，而孕晚期孕妇感染HEV后，常迅速进展为重型戊型肝炎，并伴有活跃的HEV病毒复制，死亡率可达21%以上，其确切机制不明。雌、孕激素随孕期进展逐渐升高，我们推测两种激素除了免疫调节外，还激活了某些与病毒复制和感染密切相关的信号通路比如MAPK/ERK途径，可能是孕妇重型戊肝的一个新机制。 为证实这一假说，我们将在前期研究基础上利用已确立的HEV敏感细胞系PLC/PRF/5，采用分子生物学、流式细胞仪等技术1.观察雌、孕激素对HEV RNA合成和病毒蛋白表达的影响；2.检测雌、孕激素对MAPK/ERK通路激活情况及其和细胞增殖、细胞周期和HEV复制的关系；3.研究雌、孕激素受体拮抗剂、MAPK/ERK通路特异性抑制剂对HEV复制的影响。以期从信号通路这一新的角度阐明孕期激素对HEV病毒复制的影响和机制，为防治孕妇重型戊型肝炎提供新思路和新靶点。

妊娠合并病毒性肝炎较为常见，甲、乙、丙、丁和戊型病毒性肝炎均有发生。但孕晚期感染HEV后通常病毒复制活跃，临床常进展为重型戊型肝炎，其机制主要涉及宿主（激素水平、免疫状态等）、病毒（基因型、毒力等）以及二者的相互作用。研究不同孕期雌、孕激素水平及其对HEV复制的影响，并从细胞MAPK/ERK途径激活和HEV病毒基因变异性两方面，结合本地戊肝孕妇母婴结局进行机制探讨，有助于孕妇重型戊肝的防治。首先检测到孕妇人群雌、孕激素水平随孕期进展而升高，E2和P分别为1174～2282pg/mL和23～196ng/mL；在ALT和/或AST异常孕妇中，HEV感染以散发病例存在，近期和既往感染率分别为3.92%和8.45%，总感染率高于非孕对照组；确定了HEV是本地区除HBV之外导致孕妇肝功能异常的主要肝炎病毒，且乙戊重叠多见；建立了灵敏的FQ-PCR并检测到E/P可以促进HEV在细胞中复制，但是HEV复制在蛋白水平没有显著差异，对感染细胞ERK蛋白表达及其磷酸化作用不明显；为明确HEV基因变异和流行病学特征，我们进一步对孕妇感染HEV毒株进行同源性分析显示本地孕妇与非孕人群感染的HEV均属于基因4型，且包含3个基因亚型；对戊肝孕妇母婴结局进行分析显示，妊娠合并急性HE发生重症肝炎比例为22.2%，经治疗均转归良好。我们认为，本地区孕妇HEV总感染率高于对照人群，特别是中、晚期孕妇应警惕HE的发生。孕妇人群雌、孕激素水平随孕期进展而升高，有限地促进了HEV在细胞中的复制，MAPK/ERK途径激活不明显。本地孕妇感染的HEV属于第4基因型并与其他毒株分属3个不同基因亚型，其病毒来源及特性也可能是影响其复制的因素之一。