肝癌免疫治疗新策略：IL-21联合Treg清除增强DC瘤苗诱导的抗肿瘤效应

以树突状细胞（DC）为基础的肝癌免疫治疗在体外实验中虽初见成效，但临床试验结果不甚理想，其重要原因之一是患者体内存在大量的CD4+CD25+调节性T细胞（Treg），诱导机体产生免疫抑制。因此，肝癌免疫治疗的研究重点不仅是诱导产生肝癌特异性CTL效应，消除Treg的抑制效应同样重要。IL-21是IL-2家族的新成员，与后者不同，IL-21不仅能更持久地维持并增强CTL效应，而且对Treg有很强的抑制作用。据此，本项目在前期肝癌DC瘤苗的研究基础上，设计了双向免疫治疗策略，一方面以肝癌细胞总RNA转染DC制备肝癌DC瘤苗，诱导强有力的肝癌特异性CTL效应（扶正）；另一方面，清除Treg以期改变宿主的免疫抑制状态（抑邪），同时联合应用IL-21，在增强DC瘤苗诱导CTL效应的同时，降低其诱导的免疫抑制效应，以期获得更强的抗肝癌免疫应答，提高免疫治疗效果，为肝癌免疫治疗的临床应用提供新的思路。

以树突状细胞（DC）为基础的肝癌免疫治疗在体外实验中虽初见成效，但临床试验结果不甚理想，其重要原因之一是患者体内存在大量的CD4+CD25+调节性T细胞（Treg），诱导机体产生免疫抑制。因此，肝癌免疫治疗的研究重点不仅是诱导产生肝癌特异性CTL效应，消除Treg的抑制效应同样重要。IL-21是IL-2家族的新成员，不仅能更持久地维持并增强CTL效应，而且对Treg有很强的抑制作用。在本项目中，我们联合DC瘤苗、Treg清除以及细胞因子IL-21，希望建立一种新型的肝癌免疫治疗方案，我们的研究发现：以肝癌细胞总RNA转染DC制备肝癌DC瘤苗可诱导强有力的肝癌特异性CTL效应，在体外，细胞因子IL-21可增强DC瘤苗诱导的CTL效应；在荷瘤鼠体内，清除Treg同时应用IL-21，可明显提高小鼠外周血CD8+T细胞比例及IFN-γ水平，提示该免疫治疗方案诱导产生了更强的肝癌特异性CTL免疫应答。. 本项目研究工作取得的主要成果包括：建立C57BL/6小鼠肝癌（选用鼠肝癌细胞株Hepa1-6）移植瘤模型，检测荷瘤小鼠脾脏、胸腺和淋巴结Treg数量，及Treg特征性分子Foxp3表达情况，结果显示荷瘤鼠脾脏（S）、胸腺（T）、腹股沟淋巴结（L）匀浆中Treg细胞比例显著高于对照鼠；制备肝癌细胞Hepa1-6总RNA-DC瘤苗，将其与小鼠脾脏T细胞共培养，结果显示细胞因子IL-21可增加效应效应T细胞IFN-γ分泌水平、减少Treg细胞的数量、增强DC瘤苗对肝癌细胞的体外杀伤作用；在荷瘤小鼠体内，应用低剂量环磷酰胺或抗小鼠CD25单克隆抗体进行Treg清除，联合应用DC瘤苗及IL-21，结果显示联合治疗组脾脏组织中Foxp3+细胞浸润减少、CD8细胞浸润增高、CTL对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。本课题组按照计划完成年度任务，未进行特殊调整或变动。