miR-182在多发性硬化发生过程中对FoxO1转录因子的调控作用及相关机制的实验研究

CD4+ T细胞亚群平衡失调是导致多发性硬化（MS）发病主要原因之一，而T细胞亚群分化和增殖不仅与转录因子与细胞因子调控有关，同时受控于关键因素-microRNA。近年来，microRNA参与调节自身免疫疾病逐渐被人们所认识，备受研究者关注。我们在前期工作中首次发现并证实miR-182 在MS动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病过程中起非常重要作用，同时发现，miR-182靶向调控Foxo1产生对Terg细胞抑制从而改变Th细胞亚群分化格局，这一结果目前国内外尚未见报道。本课题在前期工作的基础上，以EAE为研究对象，结合临床MS病人标本，采用免疫、分子生物、病理学和转基因小鼠等手段，进一步探讨miR-182与EAE/MS疾病的相关性，证实miR-182对EAE/MS的致病作用及相关机制。新机制和概念的提出，不仅丰富MS发病机制的理论内容，而且为今后临床治疗MS提供新的科学依据。

经过三年的科研工作，我们如期完成了课题内容。通过体内实验证实microRNA 182通过负向调控转录因子Foxo1来促进CD4+T细胞四种亚型向促炎性方向分化，进而促进EAE的发生。我们建立了microRNA 182基因过表达与基因敲减小鼠，并在此基础上建立EAE模型，通过体内实验发现，microRNA 182表达水平与EAE疾病的严重程度成正相关，而microRNA 182水平与Foxo1及Foxp3的表达成负相关，说明microRNA 182能够通过Foxo1依赖的信号通路在外周淋巴器官中特异性影响Treg细胞的功能。此外，体外慢病毒转染实验结果显示microRNA 182影响CD4+T细胞分化是通过miR182-Foxo1通路实现的，从基因水平与蛋白水平均验证microRNA 182与Foxo1成负相关，进而导致CD4+T细胞亚型失衡。我们收集了10例复发缓解型多发性硬化患者的外周血淋巴细胞，患者细胞中的microRNA 182水平要明显高于未患病者，而Foxo1表达却低于未患病者，同时CD4+T细胞四亚型失衡，分化偏向促炎性方向。在对人的淋巴细胞进行体外干扰实验时，结果也同样发现microRNA 182能够通过负向调控Foxo1促进细胞向促炎性方向分化。综上所述，microRNA 182参与MS/EAE的发生及发展，通过负向调控Foxo1抑制Treg细胞的分化，并通过microRNA 182-Foxo1通路实现对CD4+T细胞亚型间平衡与失衡的调控。我们所取得的成果以科研论文的形式完成文章7篇，其中SCI收录3篇，国内核心期刊2篇，SCI在投文章2篇，同时培养博士研究生4名，硕士研究生3名，圆满的完成了科研课题。