肝癌细胞中异常表达的FGFR3特异性剪接变异的功能效应及其调控研究

本课题组在前期研究中证实了肝细胞性肝癌存在细胞增殖和信号传导重要相关基因FGFR3的特异性高表达，并初步明确了可能影响其功能的关键剪接变异。本课题首先系统全面地分析慢性肝脏疾病和肝癌中FGFR3剪接变异类型，通过构建FGFR3异常变异体真核表达载体，研究其亚细胞定位及对下游效应基因表达的影响，以明确FGFR3剪接变异对肝癌细胞增殖分化、信号传导等恶性表型和细胞功能调控的作用。同时，建立正常肝脏细胞剪接变异的稳定表达株，研究FGFR3剪接变异的致突变作用。继而构建NIS报告基因与FGFR3偶联腺病毒载体，以分子影像技术追踪动物模型在体实时显像，深入研究FGFR3的异常剪接变异对慢性肝脏疾病和肝癌发生发展的影响，并以此为切入点研究可能的干预治疗节点。本研究不仅能够为肝癌的分子标志物和治疗靶点的研发提供实验依据，而且可望在慢性肝脏疾病和肝癌的研究方面开拓新的学术生长点，具有重要的理论和现实意义。

本课题首先系统全面地分析慢性肝脏疾病和肝癌中类型，明确了FGFR3的常规剪接体和剪接变异体的类型、序列和出现百分率。通过构建FGFR3不同剪接变异体真核表达质粒，转染进入相同遗传学背景不同侵袭能力肝癌细胞株，在细胞水平分别比较FGFR3的剪接变异对肝癌细胞生物学特性的影响。我们以分子影像技术追踪动物模型在体实时显像，更加精确地研究了FGFR3的异常剪接变异对生物学行为的影响。通过配体FGF1/FGF2和FGFR3及其突变体的亲和力定性和定量差异鉴定，FGFR3Δ7-9的自发性二聚体形成和自体络氨酸磷酸化，以及FGFR3剪接变异互作蛋白调控网络的研究，对FGFR3剪接变异对肝癌细胞生物学行为影响进行了详尽的机制研究。本研究不仅能够为肝癌的分子标志物和治疗靶点的研发提供实验依据，而且可望在慢性肝脏疾病和肝癌的研究方面开拓新的学术生长点，具有重要的理论和现实意义。