益气固表、清热解毒法通过Wnt/β-catenin信号通路调节系膜稳态的作用机制研究

慢性肾炎是我国维持性血透的首位病因。系膜病变是几乎所有肾小球疾病的共同病理改变，系膜稳态是维持正常肾小球功能和肾脏损伤修复的重要机制。Wnt /β-catenin通路在调控细胞分化、增殖、凋亡及内环境稳态等方面具有重要作用，是研究系膜稳态的重要信号通路。肺肾气虚，卫外不固，风热湿毒，内归伤肾是慢性肾炎的主要中医病机。益气固表，清热解毒法具有较好的降低蛋白尿、抑制系膜基质增生的作用。本研究拟动态观察益气固表，清热解毒法对大鼠Thy1肾炎模型及原代培养的系膜细胞中系膜稳态相关分子表达及Wnt /β-catenin通路的影响，探讨"慢性肾炎从肺论治"思想的科学性及益气固表、清热解毒法调节系膜稳态的分子机制，为中医药防治慢性肾炎及肾小球硬化提供新的客观依据，并进一步丰富慢性肾炎的中医治疗理论体系。

本研究提出慢性肾炎“从肺论治”的思想，并从中医理论层面论证这一思想的实际意义。在实验方面，我们从细胞和动物实验两个方面论证了益气清热膏调节系膜稳态的机制，并深入探讨了穿山龙的单体薯蓣皂苷的作用机制。通过实验研究发现，益气清膏含药血清可以抑制LPS刺激的系膜细胞增殖，并可以抑制系膜细胞wnt4、β-catenin和TGF-β1的mRNA和蛋白表达。穿山龙的主要单体成分薯蓣皂苷同样可以抑制LPS刺激的系膜细胞增殖反应，并可以通过wnt通路，抑制系膜细胞炎症反应，抑制细胞外基质合成，抑制wnt4、wnt5a、β-catenin和GSK-3β的mRNA和蛋白表达。用LiCl干预后该作用部分解除，证实薯蓣皂苷通过直接抑制GSK-3β和直接抑制wnt蛋白的表达两个方面，从而达到抑制wnt通路，维持系膜稳态的作用。在氨基核苷嘌呤霉素（PAN）诱导的大鼠肾病综合征动物模型实验中，益气清热膏可以降低PAN大鼠的24小时尿蛋白定量，修复足细胞损伤。益气清热膏同样可以抑制PAN大鼠肾组织wnt4、β-catenin、GSK-3β和FEN的mRNA和蛋白表达。因此，益气清热膏可能是通过抑制wnt通路从而实现其降低蛋白尿，保护足细胞损伤，重塑滤过膜屏障功能完整性的。该研究从细胞实验和动物实验两个方面观察了益气清热膏系膜细胞稳态维持和足细胞损伤的作用机制，多维度揭示了益气清热膏治疗肾脏病蛋白尿、保护肾功能、抗肾小球硬化的作用机制，阐释了“慢性肾炎从肺论治”的科学内涵，丰富了“肾主藏精，封藏失职”的理论内涵，为临床治疗慢性肾炎蛋白尿提供了新的思路，具有一定的实际意义。发表学术论文14篇，其中SCI论文2篇，培养硕士研究生3名。