白念珠菌未知功能基因CIP1的耐药相关性研究

白念珠菌感染已成为威胁生命的严重感染性疾病，而且30%的菌株具有不同程度的耐药性，从而使真菌病防治面临严峻挑战。因此，开展白念珠菌的耐药机制研究具有重要意义。本课题前期研究发现，CIP1基因与白念珠菌耐药性形成高度相关，因此本项目拟进行：①构建CIP1基因的缺失菌和高表达菌，测定它们对各类抗真菌药物敏感性的影响，并利用体外诱导方法比较亲本菌和CIP1基因缺失菌耐性形成的特点，明确CIP1基因在白念珠菌耐药性形成中的作用；②考察白念珠菌体外诱导耐药性形成过程中以及临床分离的耐药菌中CIP1基因表达水平，明确CIP1基因表达水平与耐药程度的相关性；③通过考察CIP1基因对白念珠菌药物外排功能以及金属镉离子诱导的影响， 初步明确CIP1基因参与白念珠菌耐药性形成的分子机制。本项目通过深入研究CIP1基因在白念珠菌耐药性形成中的作用及其分子机制，将有助于进一步阐明白念珠菌耐药机制，克服真菌耐药性。

由于临床上唑类抗真菌药物（尤其是氟康唑）的广泛和长期使用，导致了白念珠菌耐药性产生，这是临床治疗白念珠菌感染失败的首选原因。在本项目中，我们对白念珠菌未知功能基因（包括CIP1, CaIPF14030和CaMNN5）的功能及其在白念珠菌耐药产生过程中的作用进行了研究。我们利用URA-blaster技术对上述基因进行基因敲除，结果成功获得 CaIPF14030和CaMNN5的基因缺失菌，进一步研究发现CaIPF14030基因缺失或高表达并不影响白念珠菌对唑类药物的敏感性，但是CaIPF14030基因缺失显著增加了胞内ATP的含量，而CaIPF14030基因高表达能够显著降低胞内ATP含量，还发现CaIPF14030的表达水平受白念珠菌钙调神经磷酸酶通路调控，而CaIPF14030在白念珠菌耐药性产生过程中持续高表达，提示CaIPF14030基因可能参与调节白念珠菌耐药性产生过程中胞内ATP的产生。此外，我们研究发现CaMNN5基因缺失能够显著增加细胞表面beta-葡聚糖的暴露，从而增强宿主固有免疫细胞的免疫应答效应，最终导致宿主清楚白念珠菌感染的能力显著增强。