初级感觉神经细胞中介素及其受体在神经病理痛中的作用及机制研究

全身或局部应用中介素IMD1-53、中介素受体抑制剂IMD14-47和中介素siRNA，通过动物行为学方法观察大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）大鼠痛行为变化；应用免疫组织化学方法、原位杂交技术、RT-PCR技术、蛋白质印迹技术了解CCI大鼠背根神经节中介素及其受体和P2X3受体mRNA及蛋白表达的变化；免疫共沉淀技术了解CCI大鼠背根神经节表达的中介素及其受体在神经病理痛中与P2X3受体是否存在相互作用；应用全细胞膜片钳技术研究应用中介素IMD1-53、中介素受体抑制剂IMD14-47和中介素siRNA后，背根神经节神经元P2X3受体激动剂激活电流的变化；将CCI在体动物模型急性分离的DRG细胞与原代培养疼痛化学介质刺激模型DRG细胞或加压培养模型DRG细胞实验结合进行研究。通过本项目研究观察初级感觉神经细胞中介素及其受体对神经病理痛的作用及机理，为疼痛防治探索新方法。

本项目观察了中介素及其受体对初级感觉神经元P2X3受体介导的神经病理痛的作用及其机理。 1、动物痛行为试验结果显示全身应用中介素受体抑制剂IMD14-47可以抑制慢性神经病理痛模型大鼠痛行为反应，而应用中介素受体激动剂IMD1-53会增强慢性神经病理痛模型大鼠的痛行为反应。2、免疫组化，RT-PCR，蛋白印迹等技术观察到神经病理痛大鼠背根神经节IMD及其受体和P2X3受体表达增加，中介素受体激动剂IMD1-53可以促进神经病理痛大鼠背根神经节P2X3受体mRNA和蛋白的上调表达，中介素受体抑制剂IMD14-47可以降低神经病理痛大鼠背根神经节P2X3受体mRNA和蛋白的上调表达。3、中介素IMD1-53处理原代培养大鼠DRG神经元后，缓激肽刺激神经细胞释放的NO和游离Ca2+浓度和中介素受体抑制剂IMD14-47和中介素siRNA处理组相比显著降低。4、全细胞膜片钳试验观察到应用中介素受体激动剂IMD1-53会增强DRG神经元ATP激活电流，而中介素抑制剂IMD14-47可抑制ATP激活电流。结论： 中介素可通过增强初级感觉神经元P2X3受体兴奋介导的伤害性信息传递产生促进神经病理痛作用。