人工miRNA串连表达系统靶向沉默多基因技术抑制肝癌恶性表型的实验研究

miRNA可同时调控多个靶基因，为针对多个肝癌相关基因进行基因治疗提供了新手段。然而针对内源性miRNA的干预可能会影响被该miRNA调节的所有基因，产生非特异的效应。为克服内源性miRNA的缺点，我们根据miRNA的作用原理设计了负性调控EGF和VEGF信号通路中多个基因的人工miRNA：amiR-tj1和amiR-tj2。初步的实验结果表明amiR-tj1和amiR-tj2均能有效抑制其靶基因及相关的信号通路。本课题将进一步验证amiRNA对靶基因的特异性调控，然后以高表达的内源性miRNA前体为模板，构建hTERT启动子调控的amiR-tj1和amiR-tj2单表达及串连表达系统，转染细胞，观察单表达和串连表达系统的表达效率及其表达的端粒酶依赖性，然后研究hTERT调控的amiRNA对肝癌细胞恶性表型的影响。本课题的实施，有望为肝癌多靶点、多信号通路联合干预的基因治疗提供新思路。

通过生物信息学的方法，人工设计、合成了可特异性、同时调控肝癌中EGF/EGFR信号通路中EGFR, FOXO3A、INPP5D、DUSP1基因的amiR-tj1和同时抑制VEGF/VEGFR信号通路VEGFB、RAC2, NFATC1、PRKCB、PXN基因的amiR-tj2。构建hTERT启动子驱动的amiR-tj1和amiR-tj2单表达系统和串连表达系统，均能通过抑制其靶基因而有效抑制肝癌细胞的多种恶性表型。对肝癌的多靶点、靶向性治疗提供了新思路。