模拟病毒的多功能纳米载体输送基因的研究

本项目拟以含二硫键功能性材料MeO-PEG-S-S-DOPE（PSD）、DOPE、叶酸修饰的PEG-DSPE和硫酸鱼精蛋白（PS）为主要成分，初步模拟病毒载体的结构和功能，构建叶酸修饰的多功能纳米粒（FMNs）。针对Survivin基因构建质粒表达的shRNA(iSur-pDNA)，从细胞水平和整体动物水平评价FMNs作为干扰RNA质粒iSur-pDNA输送载体的转染效率和RNA干扰效应，并对其细胞内转染机制进行探讨。FMNs中PEG修饰可稳定FMNs的立体结构，避免网状内皮系统的识别和吞噬；叶酸修饰可促进主动靶向识别和细胞摄取；PSD中二硫键在胞内还原酶作用下断裂，恢复DOPE的功能，将PS/pDNA释放进入胞浆，PS可促进PS/pDNA向细胞核转运，而且各组分均具有良好的生物相容性。本项目旨在研究通过模拟病毒的结构和功能构建非病毒基因载体的新策略，提供一种高效、低毒非病毒基因输送载体。

该课题以含二硫键的功能性材料MeO-PEG-S-S-DOPE（PSD）、DOPE、叶酸修饰PEG-DSPE和硫酸鱼精蛋白（PS）为主要成分，尝试初步模拟病毒载体的结构和功能，构建叶酸修饰的多功能纳米粒（FMNs），通过输送针对Survivin基因的干扰RNA用于肝癌基因治疗的研究，为肿瘤的基因治疗提供一种新策略。合成了功能性材料PSD和FA-PEG-DSPE，制备了硫酸鱼精蛋白PS/DNA复合物，构建了多功能纳米粒MNs和FMNs，对其各项理化特性进行了评价；研究多功能纳米粒FMNs在不同细胞中的基因转染效率，采用MTT技术评价了FMNs的细胞毒性，并采用抑制剂方法和激光共聚焦显微成像技术研究FMNs在中的摄取特性及分布情况，探讨了FMNs提高基因转染效率的作用机制；揭示了FMNs在模型动物体内各组织部位的分布特性，并且初步评价了载有Survivin基因的FMNs在肝癌细胞模型和荷瘤小鼠模型中基因治疗的有效性。发表SCI论文6篇（IF>3），申请专利1项，获得各项荣誉与奖励4项。因此，本课题圆满完成了各项研究任务，实现了预期目标。