Wnt/β-catenin信号通路在肝细胞癌转移侵袭中的调控机制及中药的干预作用

Wnt信号传导途径与肿瘤有着密切的关系，其通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程。本研究以肝细胞癌的转移与Wnt/β-catenin信号通路密切相关为切入点，以鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移的机制研究为目标，拟从体内和体外两方面，以不同转移潜能肝癌细胞株Hep3B(不转移)、MHCC97-H(高转移)、MHCC97-L(低转移)和裸鼠人肝癌转移模型为研究对象，采用血清药理学方法，Western blot、RT-PCR、免疫组化、ELISA等技术，首先筛选出Wnt/β-catenin信号转导通路中与肝细胞癌转移相关的关键因子，在此基础上，再深入探讨鳖甲煎丸干预肝细胞癌转移的作用机理。本研究有助进一步阐明鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移的分子机制，为该药应用于抗肝癌转移的临床研究提供充分的理论依据。同时，对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、深化和完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义。

Wnt信号传导途径与肿瘤有着密切的关系，其通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程。本研究以肝细胞癌的转移与Wnt/β-catenin信号通路密切相关为切入点，以鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移的机制研究为目标，以肝癌细胞模型、裸鼠人肝癌转移模型及大鼠肝癌模型为研究对象，采用血清药理学方法，Western blot、RT-PCR、免疫组化、ELISA等技术，研究了Wnt/β-catenin信号通路在肝细胞癌转移侵袭中的调控机制及中药鳖甲煎丸的干预作用。. 我们首先研究了鳖甲煎丸对肝癌细胞生长、细胞周期、粘附、侵袭能力的影响，研究表明鳖甲煎丸能显著抑制肝癌细胞的生长、粘附和转移。在此基础上，系统研究了肝癌细胞中β-catenin蛋白表达情况，检测了WNT信号通路中的受体、信号分子及抑制基因的表达，筛选出Wnt/β-catenin信号转导通路中与肝细胞癌转移相关的关键因子，深入探讨鳖甲煎丸干预肝细胞癌转移的作用机理。. 研究证实鳖甲煎丸对于肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路存在抑制作用。该抑制作用与以下几个方面有关：1. 下调膜受体FZD7的表达；2. 抑制β-catenin基因的转录及表达；显著下调抑制基因DKK-1的表达； 3. 抑制GSK-3β抑制蛋白Akt1的表达及活性，促进β-catenin的降解4. 通过WNT/β-catenin通路调控Tbx3的表达，继而通过Tbx3/p19/MDM2通路激活抑癌基因p53，来抑制肝癌细胞的生长，促进肝癌细胞的凋亡，从而达到抑制肝癌的转移侵袭作用。5. 鳖甲煎丸对肝癌细胞中MMP-9和VEGF表达起抑制作用。 这符合鳖甲煎丸对肝癌多位点、多层次的药理作用特点。. 鳖甲煎丸药物血清可以能减少胞浆和胞核中β-catenin蛋白水平、降低β-catenin/TCF复合物的活性，因而下调DKK-1、cyclin D1、 MMP-2水平。并且，wnt/β-catenin通路的抑制与下调GSK-3β，AKT蛋白磷酸化有关。我们证实了β-catenin蛋白是鳖甲煎丸的一个特异性作用位点。.本研究有助进一步阐明鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移的分子机制，为该药应用于抗肝癌转移的临床研究提供充分的理论依据。同时，对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义。