Wnt与NF-κB信号通路串话激活HSC的调控机制及中药的干预作用

As the intermediate link that many chronic liver disease must pass through to Irreversible cirrhosis,hepatic fibrosis has been one of the most serious health risk problems. Moreover,the activation and proliferation of HSC play a pivotal role in the happening and development of hepatic fibrosis.Our purpose is to study the molecular mechenism of anti-liver fibrosis of Biejiajian Pills by checking the effect of crosstalk between Wnt and NF-κB signal pathway in HSC activation and proliferation.We will use in-vitro and in-vivo experiments to study the mechanism choosing rat hepatic stellate cell and the carbon tetrachlorideinduced liver fibrosis modeI in rats as research object,respectively. We plan to screen out key factors related to HSC activation and proliferation of crosstalk between Wnt and NF-κB signal pathway using serum pharmacological method,plasmid transfection, Western blot,RT-PCR, immunohistochemistry, ELISA,et al. On the basis,making a further discussion of the effect of Biejiajian Pills on these factors.Our study can be of important significance in deepening the fundermental research of hepatic fibrogenesis as well as having great contribution in further elucidating the targets and routes of anti-liver fibrosis of Biejiajian Pills which provides full theory basis for clinical application of Biejiajian Pills.

肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的必经中间环节，其进一步发展将导致不可逆转的肝硬化，目前已成为世界范围内危害健康的重要问题之一。HSC活化、增殖是肝纤维化发生、发展的关键事件，本研究以HSC为靶标，以Wnt与NF-κB信号通路串话调控HSC活化、增殖为切入点，以鳖甲煎丸抗肝纤维化的分子机制研究为目标，拟从体内和体外两方面，以鼠肝星状细胞系HSC-T6和四氯化碳肝纤维化模型大鼠为研究对象，采用血清药理学方法及质粒转染、Western blot、RT-PCR、免疫组化、ELISA等技术，首先筛选出Wnt与NF-κB信号通路串话中与肝HSC活化、增殖相关的关键因子，在此基础上，再深入探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理。 本研究对深化和完善肝纤维化形成的基础理论研究具体十分重要的意义，同时有助进一步阐明鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用靶点和途径，为该药应用于临床提供充分的理论依据。

本研究以Wnt和NF-κB信号通路串话调控HSC活化增殖的分子机制及鳖甲煎丸抗肝纤维化的干预作用为研究目标，以大鼠肝星状细胞HSC-T6及肝纤维化大鼠模型为研究对象，采用血清药理学方法、慢病毒转染、免疫组化、western-blot等技术，研究Wnt和NF-κB信号通路相互串话在肝纤维化中的调控机制及鳖甲煎丸的干预作用。.研究首先使用慢病毒转染HSC-T6，分别敲减β-catenin和p65的表达，探讨Wnt与NF-κB信号通路串话影响HSC-T6活化、增殖以及相关因子表达的分子机制。研究表明肝星状细胞中β-catenin和p65分别作为Wnt和NF-κB信号通路中最关键的信号分子，存在着相互作用，β-catenin的减少能上调p65的表达，反之亦然，其相互串话能调控HSC-T6的活化、增殖以及肝纤维化密切相关的细胞因子如MMP-9，MMP-2，TIMP-1 mRNA，CTGF，TGF-β1 mRNA的表达水平。.在此基础上，进一步研究了鳖甲煎丸对肝星状细胞中Wnt和NF-κB信号通路的影响。鳖甲煎丸对Wnt信号通路的抑制作用与两个方面有关：抑制β-catenin基因的转录及蛋白表达，显著上调抑制基因DKK-1的表达；抑制GSK-3β和AKT的磷酸化，促进β-catenin的降解。鳖甲煎丸对NF-κB信号通路的抑制作用与两个方面有关：抑制p65基因的转录及蛋白表达；直接上调IκBα的表达，促进p65的降解。鳖甲煎丸能够同时抑制β-catenin和p65的表达，影响其相互作用，表明了鳖甲煎丸通过干预Wnt和NF-κB信号通路相互串话影响肝星状细胞的活化、增殖来达到抗肝纤维化的作用。鳖甲煎丸能够抑制CTGF、TGF-β1、TNF-α、TIMP-1的表达，上调MMP-2、MMP-9的表达，从而减轻肝纤维化程度，符合鳖甲煎丸对肝纤维化多位点、多层次的药理作用特点。.本研究对寻找肝纤维化新的治疗靶点、深化和完善肝纤维化的基础理论研究具有重要的意义。同时有助于阐明鳖甲煎丸抗肝纤维化的分子机制，为该药应用于抗肝纤维化的临床研究提供充分的理论依据。