泛素结合酶E2C在脑胶质瘤细胞G2/M期检验点中的作用机制研究

细胞有丝分裂过程中G2/M期检验点机制紊乱是肿瘤发生发展的重要原因之一。我们前期工作发现：G2/M检验点蛋白成员之一－泛素结合酶UBE2C在脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞G2/M期存在过度表达，可能与胶质瘤细胞恶变进程密切相关。但UBE2C是否会造成G2/M检验点机制紊乱，促成胶质瘤细胞恶性转型，目前尚不明确。本课题拟首先采用细胞周期同步化及泛素化实验等方法，研究UBE2C参与G2/M检验点相关蛋白的泛素化降解的机制，并观察其对胶质瘤细胞G2/M期检验点以及细胞分裂的影响；然后通过过表达和敲减UBE2C在G2/M期检验点的表达，分别观察其对胶质瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期等细胞表型的影响。这些实验结果，将有助于深入阐明UBE2C在胶质瘤细胞G2/M检验点中的功能角色及其促成G2/M检验点紊乱的机制，并可能为将来临床脑胶质瘤的靶向治疗提供理想的分子靶标。

细胞有丝分裂过程中G2/M期检验点机制紊乱是肿瘤发生发展的重要原因之一。我们前期工作发现：G2/M检验点蛋白成员之一－泛素结合酶UBE2C（又称泛素结合酶E2C，UbcH10）在脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞G2/M期存在过度表达，可能与胶质瘤细胞恶变进程密切相关。但UbcH10是否会造成G2/M检验点机制紊乱，促成胶质瘤细胞恶性转型，目前尚不明确。本课题采用细胞周期同步化等方法，研究UbcH10参与G2/M检验点相关蛋白的泛素化降解的机制，并观察其对胶质瘤细胞G2/M期检验点以及细胞分裂的影响；然后通过过表达和敲减UbcH10在G2/M期检验点的表达，分别观察其对胶质瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期等细胞表型及有丝分裂的影响。结果发现：UbcH10 mRNA与蛋白表达水平与胶质瘤级别成正相关关系；UbcH10在U251胶质瘤细胞中的表达呈细胞周期依赖性，在G2/M期达到高峰，通过降解细胞周期蛋白Cyclin B1促进胶质瘤细胞分裂，过度表达的UbcH10通过对胶质瘤细胞G2/M检验点蛋白Cyclin A、Cyclin B1的泛素化降解，从而终止G2/M检验点机制，促使胶质瘤细胞进行不成熟分裂，引起M期/分裂间期细胞比率下降及多核细胞比例增加，染色体错误分离事件增多；敲减UbcH10在胶质瘤细胞中的表达，可抑制胶质瘤细胞的增殖并促进其凋亡，并可阻滞细胞于G2/M期。这些实验结果，有助于深入阐明UbcH10在胶质瘤细胞G2/M检验点中的功能角色及其促成G2/M检验点紊乱的机制，并可能为将来临床脑胶质瘤的靶向治疗提供理想的分子靶标。