基于代谢组学的盐巴戟天炮制原理探究

本课题拟采用中药化学-药理药效-代谢组学的综合方法对巴戟天盐炙后引起疗效变化（补肾壮阳）的物质基础进行分析，进而初步阐明盐巴戟天的炮制原理。主要通过生、盐炙巴戟天作用于正常大鼠与肾阳虚模型大鼠，在对整体动物没有任何损伤的状态下，在一定时间内收集尿液，采用LC-MS或1H-NMR-MS对尿液进行检测，用主成分分析法（PCA）对数据进行处理，对代谢产物及内源性代谢物进行研究。在收集完尿液后对动物肾上腺进行病理切片观察及血液生化指标检测，找出巴戟天盐制前后代谢物质组生物标志物的变化与药效变化的相关性，进一步找出盐制后产生"补肾壮阳"功效的物质基础。二者的代谢指纹图与生、盐巴戟天水提物的LC-MS原始指纹图对比，综合分析，初步阐明盐巴戟天的炮制原理。本课题首次采用代谢组学的方法研究中药饮片的炮制原理，对如何从代谢组学的角度科学地揭示中药饮片炮制原理具有一定的启发和示范作用，是值得系统研究的课题。

课题组开始紧紧扣题研究，发现从代谢组学的角度研究盐巴戟天的炮制原理数据分析需大量资金后，课题组立即转向另一角度氨基酸代谢差异性对盐巴戟天炮制原理进行探索，以期能部分弄清盐巴戟天炮制后补肾助阳的物质基础。主要通过对生、盐巴戟天的化学成分指纹图谱进行研究，找出炮制后发生变化的成分群。并提取纯化发生变化较大的部位进行药效实验，发现提取纯化的多糖部位并没有文献报道的补肾助阳作用，而是其水煎液有明显的补肾助阳作用。生巴戟天临床祛风除湿力胜，其中蒽醌类与环烯醚萜类化合物含量较盐制品高，是其祛风湿的主要物质基础，而多糖炮制后含量明显升高，为盐巴戟天补肾助阳的物质基础。通过模拟一次性大剂量注射氢化可的松与腺嘌呤致肾阳虚动物模型对比，发现腺嘌呤致肾阳虚动物模型更接近中医上肾阳虚致病过程缓慢、长期积累等特点，故选用腺嘌呤造模。通过检测大鼠体重、肾脏系数及睾丸系数、血清尿素氮、肌酐、血清T3、T4、17-羟基皮质类固醇和睾酮含量等的变化。结果显示，盐巴戟天可以降低腺嘌呤诱导的肾阳虚模型体内血肌酐和尿素氮，升高17-OH-CS和睾酮及T3和T4水平。提示盐巴戟天可以通过改善上述三大轴的作用产生补肾助阳功效。大鼠分为空白对照组、模型组、正常巴戟天组、正常盐巴戟天组、巴戟天+腺嘌呤组、盐巴戟天+腺嘌呤组、阳性对照组七组，收集第0、3、7、14、21天尿液，用HPLC-MS检测尿液中氨基酸的变化。结果显示巴戟天盐制后对肾阳虚动物体内的氨基酸代谢有一定的影响，尤其是对体内组氨酸代谢变化的影响比较显著，除此之外，对丙氨酸、丝氨酸等也有一定程度的影响，提示巴戟天盐制后对肾阳虚大鼠三羧酸循环发生的障碍得以改善，具体机制有待进一步研究。