基于代谢组学的“汗渍法”炮制苗药了哥王减毒机制研究

Wikstroemia indica C. A. Mey., a member of the genus Wikstroemia belonging to the family Thymelaeaceae, is a medicinal plant mainly distributed through out in the Miao area of China. With heat clearing and detoxicating, detumescence and analgesic effects. Mainly used for the treatment of diseases such as pneumonia, bronchitis, hepatitis, liver cirrhosis, nephritis, tumor, traumatic injury, as a medicine often used for the Miao area. The effect of the drug is effective, but with high toxicity, clinical application is limited. In order to reduce its toxicity, the research group conducted the research on the processing methods, selected "sweat soaking method" processing is the best method for reduce-toxicity, can significantly reduce the toxicity of wikstroemia indica. But because of the diversity of mechanism in reduce-toxicity and complexity of changes of the toxic components before and after processing, mechanism in reduce-toxicity of "sweat soaking method" processing wikstroemia indica is unclear for the conventional method, difficult to study. Therefore, this project is based on metabonomics from relationships and variation of “chemical substances transformation-toxicity reducing”of before and after processing, more deeply and systematically to study on the mechanism in toxicity reducing of “sweat soaking method” processing Miao medicine wikstroemia indica, to reveal the scientific connotation of toxicity reducing, provide the basis for clinical application of wikstroemia indica, to provide a new idea and method for the evaluation of the safety and processing mechanism of Miao medicine.

了哥王来源于瑞香科荛花属植物了哥王(Wikstroemia indica (L.)C.A.Mey.)的干燥根。具有清热解毒、消肿散结、止痛等功效，主要用于治疗肺炎、支气管炎、肝炎、肝硬化、肾炎、肿瘤、跌打损伤等疾病，为苗族地区常用的一种苗药。该药疗效确切，但毒性很大，临床应用受到限制。为了降低其毒性，课题组对其炮制方法进行了研究，筛选出“汗渍法”炮制是其最佳减毒方法，能显著降低了哥王的毒性。但由于炮制前后毒性成分变化的复杂性以及减毒机制的多样性，常规方法对“汗渍法”炮制了哥王的减毒机制阐述不清，研究难度大。因此，本研究在前期研究的基础之上，采用代谢组学技术对“汗渍法”炮制了哥王前后毒性成分的转化-减毒机制之间的联系与变化规律进行深入的研究，旨在阐明了哥王“汗渍法”炮制减毒机制的科学内涵，为了哥王的临床应用提供依据，为苗药的安全性及炮制机制评价提供一种新的思路和方法。

了哥王为苗族地区常用的一种苗药，疗效确切，但毒性很大，为了降低其毒性，课题组在前期研究中筛选出“汗渍法”炮制是其最佳炮制减毒方法，但其减毒机制不明确。因此，本研究在前期研究的基础之上，对了哥王的毒性部位进行了研究；采用GC-MS技术结合细胞毒性实验对了哥王的毒性成分进行了筛选；采用UPLC-Q-TOF/MS技术对了哥王“汗渍法”炮制前后的物质基础变化进行了研究；采用动物实验对了哥王“汗渍法”炮制前后毒性进行了对比研究；采用代谢组学的1HNMR技术对了哥王炮制前后大鼠尿液、血浆的代谢进行了研究；阐明“汗渍法”炮制了哥王前后毒性成分的转化-减毒机制之间的联系与变化规律。研究结果表明，石油醚部位是了哥王的主要毒性部位，从石油醚部位新分离出3个二萜原酸酯类化合物（YH-10、YH-12、YH-15）的IC50值较小，毒性大，是石油醚部位的主要毒性成分，也是了哥王的主要毒性成分。“汗渍法”炮制了哥王后，其主要毒性成分YH-10、YH-12和YH-15含量显著下降，是“汗渍法”炮制了哥王减毒的主要物质基础变化机理。了哥王生品对大鼠血清中反映肝肾功能的生化指标有显著影响，对肝肾组织产生病理损伤，对肺也有轻微的损伤，炮制品对反映肝肾功能的生化指标和组织的影响作用小，“汗渍法”炮制了哥王能降低其毒性。了哥王炮制前后大鼠尿液、血液1HNMR图谱的色谱峰强度变化大，生品大于炮制品。了哥王生品给药后能造成大鼠肝脏线粒体受损和肾小管损伤，三羧酸循环、胆碱代谢、氨基酸类物质的代谢和生物合成等代谢通路受阻，能量代谢降低。炮制品与生品相比，具有反向调节或减小对体内氨基酸类、有机酸、能量物质及其肝肾毒性代谢标记物水平的影响，从而减小对肝脏线粒体和肾小管损伤，减小对三羧酸循环、胆碱代谢、氨基酸类物质的代谢和生物合成等代谢通路的影响，达到降低毒性作用的目的。本项目的研究，阐明了“汗渍法”炮制了哥王的减毒机制的科学内涵，为了哥王的临床应用提供依据，为苗药的安全性及炮制机制评价提供一种新的思路和方法。