激活Wnt/β-catenin信号通路改善干细胞源性血管生成作用的研究

针对干细胞移植治疗下肢缺血时不能满足临床需要的现状，在我们前期研究中发现内皮细胞形成不足，结合新近报道抑制β-catenin影响血管内皮形成的研究，我们提出假说：在干细胞源性血管生成中，通过Wnt3a过表达激活Wnt/β-catenin通路使细胞内β-catenin升高，促进VEGF和Ang-2等基因转录，使内皮细胞及其周围基质和周细胞增多。我们拟采用标记内皮细胞的Tie2-cre、标记周细胞的α-actin-cre和标记Ⅰ型胶原的COL1A-cre三种转基因鼠，分别与ROSA26鼠杂交后得到三种可检测相应标记的转基因小鼠，然后观察携带Wnt3a的腺病毒载体联合内皮祖细胞在缺血部位局部注射对治疗性血管生成中以上三种标记的影响，以探索Wnt3a、内皮细胞及其周围基质和细胞的作用，对阐明干细胞源性血管生成以及Wnt信号通路在此过程中的机制有重要作用，为干细胞治疗缺血性疾病的规模化应用奠定基础。

在我们及以前的研究中，内皮祖细胞可以从动物的骨髓细胞和脐带血中分离，具有改善了血管生成的性能。这里我们探讨过表达Wnt3a基因在内皮祖细胞（EPCs ）中的效果，并探讨了使用遗传修饰的内皮祖细胞的新治疗性血管生成的策略。正如我们先前报道，内皮祖细胞可以从动物外周血培养。腺病毒载体编码的Wnt3a基因转染内皮祖细胞。的Wnt3a的表达首先激活的Wnt / β-catenin信号通路导致增加的核转β-连环蛋白和血管生成细胞因子的分泌增加（血管内皮生长因子-A）。它增强了生存，增殖和内皮祖细胞的分化。更重要的是，内皮祖细胞注射腺病毒载体的Wnt3a基因编码成鼠后肢缺血模型的移植组合显著改善与内皮祖细胞相比，血流和组织毛细血管密度仅治疗组和后肢缺血模型。以上的Wnt3a在内皮祖细胞表达增强了在体外和在这些细胞群的体内血管发生效力。这些数据提供的证据该WNT3途径可能在内皮祖细胞的血管生成中起到关键作用。此外，内皮祖细胞的遗传修饰，以促进这一信号通路将促进治疗性血管生成的功效。. 本研究的主要结论：1.构建了从物骨髓细胞和脐带血中分离和鉴定动的内皮祖细胞新的实验体系。2.在转染的Wnt3a基因的内皮祖细胞体外检测VEGFA和phosphateβ -连环蛋白表达水平升高。3.已在小鼠后肢缺血模型的Wnt3a转染内皮祖细胞治疗检测VEGFA和phosphateβ -连环蛋白表达水平升高。4.过表达WNT3a基因的内皮祖细胞可以显著改善下肢缺血区域的血流水平。