卵巢癌免疫反应抗原域蛋白2调控丙型肝炎病毒复制的分子机制

Hepatitis C virus (HCV) infection is a serious threat to human health. However, the replication mechanism of HCV is not fully understood. HCV non-structural protein NS4B is an essential viral protein for HCV RNA replication. By tandem affinity purification and LC-MS/MS analysis, we identified OCIA domain-containing protein 2 (OCIAD2 ) that interacted with NS4B. Recently, our assays such as gene silencing indicated that OCIAD2 promoted HCV replication. To elucidate the underlying molecular mechanism, this project will focus on: （1）examining the interaction and binding site of OCIAD2 with NS4B by co-immunoprecipitation and immunofluorescence; (2) investigating the effect of interaction of OCIAD2 with NS4B on HCV RNA replication by using OCIAD2 mutants; (3) exploring the effect of OCIAD2 on the formation and structure of HCV RNA replication complex by using immunofluorescence, electron microscope and enzymatic resistance assays; (4) analyzing the effect of OCIAD2 on HCV entry, HCV protein translation, HCV virus particle assembly and release using pseudotyped virus；replicon and virus propagation systems. The results from this project will provide novel insights into HCV replication mechanism and the development of anti-HCV drugs.

丙型肝炎病毒（HCV）严重威胁人类健康，但其复制机制尚未完全明确。HCV蛋白NS4B是病毒RNA复制必需的蛋白。通过亲和纯化和质谱鉴定我们发现NS4B与细胞蛋白OCIAD2相互作用。近来，我们的基因沉默等试验表明卵巢癌免疫反应抗原域蛋白2 (OCIAD2) 促进HCV复制。本项目拟进一步研究OCIAD2蛋白调控HCV复制的分子机制, 主要研究内容包括：（1）免疫共沉淀和免疫荧光分析OCIAD2与NS4B的相互作用并识别其结合位点；（2）使用OCIAD2突变体分析OCIAD2与NS4B相互作用在HCV RNA复制中的作用；（3）电镜和酶抗性等实验分析OCIAD2对HCV RNA复制复合体形成和结构的影响；（4）使用HCV假病毒，复制子和病毒感染系统分析OCIAD2对HCV进入细胞，蛋白翻译，病毒粒子组装和释放的影响。本课题研究将为HCV复制机制的阐明和抗HCV药物的研发提供新的理论依据。

丙型肝炎病毒（HCV）严重威胁人类健康，但其复制机制尚未完全明确。本项目着重深入开展了如下研究：（1）免疫共沉淀和免疫荧光分析OCIAD2与NS4B的相互作用并识别其结合位点；使用OCIAD2突变体分析OCIAD2与NS4B相互作用在HCV RNA复制中的作用；免疫荧光等实验分析OCIAD2对HCV RNA复制复合体形成和结构的影响；使用复制子和病毒感染系统分析OCIAD2对HCV增殖阶段的影响 OCIAD2与病毒蛋白NS5A，细胞蛋白PREB和Surfeit 4的互作分析。（2）部分资助了乙脑病毒基因工程蛋白疫苗LTB-NS1△63研究、奥密克戎毒株逃逸国产疫苗研究、丙肝病毒基因工程多表位疫苗R9-Bp和Bp免疫性能研究。取得的重要结果如下：A、发现OCIAD2是新的HCV宿主辅因子。B、研发了乙脑病毒基因工程蛋白疫苗LTB-NS1△63。C、发现奥密克戎毒株可逃逸国产疫苗。D、研发了丙肝病毒基因工程多表位疫苗LTB-R9-Bp和Bp。本课题研究将为HCV复制机制和药物研发、新冠和乙脑等病毒病防控提供新的理论依据。