人类免疫缺陷病毒Vpr蛋白激活丙型肝炎病毒复制的分子机制研究

Due to sharing the routes of transmission, co-infection of human immunodeficiency virus (HIV) and hepatitis C virus (HCV) is very common. HIV infection can enhance HCV replication and affect HCV disease progression. Epidemiological studies have shown that HIV infection can enhance the replication of hepatitis C virus and accelerate the development of fibrosis progression. Vpr has been shown to play an important role in HIV infection.In vitro cell test, We have shown shown earlier that the replication of HCV was significantly enhanced in the Vpr expression. Whereas the regulatory mechanisms of vpr influencing hepatitis C virus are still uclear, and the precise role of vpr in HIV/HCV co-infection has also not been clarified yet. To explore the mechanisms, the aim of the project is to: 1.Through the cell and molecular biology technology, investigate the impact of Vpr on hepatitis C virus by directly targeting for HCV5 'noncoding region;2.Identify the role of miR-122 on the process of vpr and hepatitis C virus;3.Examine the effect of Sp1 and CXCL8 protien on vpr indirectly regulation and control of HCV replication. The long term goal is to clarify a new mechanism of HIV mediated the replication of HCV, and provide a novel therapeutic target for the treatment of HIV/HCV coinfection.

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)有着共同的传播途径，其混合感染率极高。流行病学研究表明HIV感染可促进HCV病毒复制，加速HCV疾病的进程。Vpr作为HIV基因组中重要的辅助基因之一。申请者前期研究发现：HIVVpr可促进HCV的复制。但迄今，HIV/HCV混合感染患者中HIV促进HCV复制的机制尚不明确。本项目采用细胞分子生物学技术，通过观察组Vp对HCV5'非编码区直接调控的分子机制；通过影响CXCL-8蛋白、与转录因子Sp1结合、miR-122间接调控HCV的复制，旨在阐明HIV/HCV混合感染患者中，HIV促进HCV复制及影响其疾病进展的新机制，为HIV/HCV混合感染的治疗提供新方向。

HIV和HCV因有着共同的传播途径，其混合感染率很高，而混合HCV感染引起的肝脏疾病成为影响HIV感染者生存的重要原因。目前流行病学资料证实HIV可促进HCV病毒复制，可导致HCV持续病毒感染。但到目前HIV影响HCV复制的具体机制仍未明确，开展HIV影响HCV复制分子机制的研究具有重要意义。Vpr蛋白作为HIV重要的辅助蛋白之一，在HIV的持续感染和致病过程中有着重要作用。在本研究中，我们探讨了Vpr对HCV复制的影响及其调控机制，旨在为HIV影响HCV复制的机制提供新的实验依据。. 通过使用HCVJFH1感染模型和OR6细胞模型，予以荧光定量PCR技术、免疫蛋白印迹和荧光素酶活性实验检测Vpr对HCVRNA复制和HCV蛋白表达的影响。通过双荧光素酶活性实验和免疫蛋白印迹检测Vpr对HCV 5’UTR活性的调控影响。通过双荧光素酶活性实验和Realtime PCR检测Vpr对miR-122启动子活性、precusor miR-122和miR-122转录影响。通过抑制miR-122的表达，予以荧光素酶活性实验、荧光定量PCR技术和免疫蛋白印迹检测miR-122在Vpr上调HCV 5’UTR活性、促进HCVRNA复制和HCV蛋白表达中的影响。. Vpr在JFH1感染系统中显著促进HCVRNA的复制和HCV蛋白的表达；在OR6细胞中，Vpr也可明显上调HCV海肾荧光素酶活性和HCV蛋白的表达。通过双荧光素酶活性实验，我们发现Vpr可上调HCV 5’UTR的活性，呈剂量依赖性。使用Molt-4细胞和Huh7.5.1细胞共培养，发现Vpr可从淋巴细胞中分泌出来进入肝细胞中发挥生物学效应。进一步的研究表明Vpr可通过上调miR-122的启动子活性、precusor miR-122来上调miR-122的表达。另外，使用miR-122的抑制剂，能显著阻断Vpr对HCV 5’UTR的上调作用，同样还可在JFH1感染系统和OR6细胞中显著废除Vpr对HCVRNA复制和HCV蛋白的影响。. 总之，我们证明了HIV Vpr促进HCV病毒复制是通过上调miR-122这条途径来实现的，阐明了HIV促进HCV复制的分子机制。这些发现为我们解答在HIV/HCV混合感染中为何HIV能够促进HCV病毒的复制提供了新的思路，也为HIV/HCV混合感染的治疗提供了新的方向。