丙型肝炎病毒感染中SND1蛋白调节HCV RNA复制的分子机制研究

Hepatitis C virus is a major human pathogen. People are chronically infected who develope chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. To understand HCV life cycle and antiviral reaction in host cells has a great clinical significance. Recently, antiviral research in Stress Granule is becoming focus. However,the mechanism is not elucidated. The study shows that viral infection activate protein kinase R to inhibit translation and induce formation of SG. Several components of SG participate in regulating HCV RNA replication and translation. Our research group first found that SND1 ,as a vital component, colocalizes with G3BP and Ago2 in SG under stress. Thus,we speculate SND1 might regulate HCV RNA life cycle. Our project employ HCV-JFH virus-infected Huh7 cell and utilize immunofluorescence,confocal imaging technique,RNAi and FISH to discuss the mechanism of SND1 regulating HCV RNA replication in HCV infection. It would help to enrich theoretical basis of antiviral reaction and expand new thoughts for clinical therapy of hepatitis.

丙肝病毒感染机体常引发慢性肝炎、肝硬化甚至肝细胞癌，深入了解HCV感染宿主细胞后其生命周期变化及与宿主细胞间抗病毒反应有重要临床意义。近年，对应激颗粒抗病毒反应研究成为热点，但具体机制仍不清。研究表明病毒感染细胞后可活化PKR，抑制翻译，诱导SG形成。SG中的多种蛋白都被证实参与调节HCV的复制、翻译。本课题组前期研究首次证实，SND1与G3BP、Ago2在应激刺激下聚集形成SG，是SG中的重要蛋白。由此，我们推测SND1在聚集到SG过程中很可能参与调节HCV RNA在细胞内代谢过程。本课题以HCV-JFH感染Huh7细胞为模型，利用免疫荧光染色、激光共聚焦成像、RNA干扰、荧光原位杂交等技术探讨SND1在HCV感染中调节其RNA复制的分子机制，从而有助于丰富抗病毒的分子理论，为临床拓展抗病毒治疗的新思路。

丙肝病毒感染机体常引发慢性肝炎、肝硬化甚至肝细胞癌，深入了解HCV感染宿主细胞后其生命周期变化及与宿主细胞间抗病毒反应有重要临床意义。近年，对应激颗粒抗病毒反应研究成为热点，但具体机制仍不清。研究表明病毒感染细胞后可活化PKR，抑制翻译，诱导SG形成。SG中的多种蛋白都被证实参与调节HCV的复制、翻译。本课题组前期研究首次证实，SND1与G3BP、Ago2在应激刺激下聚集形成SG，是SG中的重要蛋白。由此，我们推测SND1在聚集到SG过程中很可能参与调节HCV RNA在细胞内代谢过程。本课题以HCV-JFH感染Huh7细胞为模型，利用免疫荧光染色、激光共聚焦成像、RNA干扰、荧光原位杂交等技术探讨SND1在HCV感染中调节其RNA复制的分子机制，从而有助于丰富抗病毒的分子理论，为临床拓展抗病毒治疗的新思路。本项目的研究结果证明SND1可以与HCV的非结构蛋白NS5B相互作用，同时我们通过免疫沉淀实验和RNA Pulldown实验证实SND1是HCV RNA复制复合物中的重要组分蛋白之一。我们利用免疫染色和激光共聚焦显微技术证实在转染了JFH-HCV的Huh7细胞中，SND1与HCV Core蛋白产生共定位。另外，利用siRNA的RNA干扰技术将细胞中的SND1水平敲低后发现会降低HCV RNA复制效率。我们也进一步证明在SND1调节HCV RNA复制分子机制中，当SND1表达水平被降低后，HCV RNA复制效率降低并不依赖于microRNA-122的参与作用，证明了microRNA-122不影响SND1参与的HCV RNA复制作用。