分子伴侣Tapasin修饰经胞内转运的CTL表位肽诱导特异性CTL的机制研究

研究表明HBV特异性细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T cell，CTL）在清除HBV感染中起着关键作用，如何安全、有效地诱导HBV特异性CTL倍受关注。我们的前期研究已证实抗原的胞内转运能增强特异性CTL反应抑制HBV复制。本课题通过构建高效的胞浆转导肽CTP、HLA-A2限制性HBcAg18-27表位肽与分子伴侣Tapasin的融合蛋白，体外刺激DC及体内免疫HBV转基因小鼠，旨在借助胞浆转导肽CTP的特性，将外源性的CTL表位肽带入抗原提呈细胞胞质，转化为内源性抗原，在Tapasin蛋白的修饰协同作用下，形成MHC/多肽复合物进入MHC-I类分子抗原提呈途径，更有效地刺激机体产生HBV特异CTL反应。本课题将阐明Tapasin蛋白在诱导HBV特异性CTL反应中的作用机制，进一步为乙肝的免疫治疗提供新思路。

尽管乙肝疫苗有效的控制了乙肝病毒（HBV）的传播，但HBV感染仍是一个全球性的问题。通过抗原刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTL)是清除慢性HBV感染者体内病毒的一个有效途径。胞质转导肽（cytoplasmic transduction peptide, CTP）转导的融合蛋白定位于胞浆，可将不同蛋白及多肽转入细胞浆中。HBcAg18-27为具有免疫优势的HLA-A2限制性CTL表位肽，在90% HLA-A2阳性的急性自限性HBV感染者中能诱发强大的CTL反应。分子伴侣Tapasin是抗原提呈相关运载体蛋白（TAP）的基因产物，与人类主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ类分子同为免疫球蛋白超家族成员，Tapasin在形成抗原肽MHC/多肽复合物中有重要作用。本课题通过构建高效的胞浆转导肽CTP、HLA-A2限制性HBcAg18-27表位肽与分子伴侣Tapasin的融合蛋白，体外刺激DC及体内免疫C57BL/6近交系小鼠和HBV转基因小鼠，旨在借助胞浆转导肽CTP的特性，将外源性的CTL表位肽带入抗原提呈细胞胞质，转化为内源性抗原，在Tapasin蛋白的修饰协同作用下，形成MHC/多肽复合物进入MHC-I类分子抗原提呈途径，更有效地刺激机体产生HBV特异CTL反应。本课题体外实验证实了我们构建的CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白具有胞膜穿透能力并有效定位于胞质，体外实验也证实了该融合蛋白能刺激DC成熟，提高IL-12p70水平，能有效刺激T淋巴细胞的增殖并可以有效增加特异性CTL的表达。体内实验显示, CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白能在体内有效诱导特异性CTL反应并有很强的抗病毒功能，并且与JAK/STAT通路活性有关。这些结果提示该融合蛋白具有免疫激活功能并且能增加特异性CTL的表达，为抗HBV感染疫苗开发提供新的思路。