融合基因 E2A-HLF对TRAIL死亡受体的作用研究

t(17;19)-ALL预后极差，t(17;19)形成融合基因E2A-HLF。我们发现t(17;19)-ALL细胞株对TRAIL敏感且高表达 DR4/DR5。本研究拟以四株t(17;19) ALL细胞株为对象，1)应用流式细胞仪分析、实时定量RT-PCR、免疫着色法等，观察细胞株对rhsTRAIL的敏感性并分析凋亡通路；2)将E2A-HLF及两种变异体转染697等细胞，检测TRAIL受体在野生株与转染株的表达水平及TRAIL对这些细胞增殖的影响，明确E2A-HLF的作用；3)EMSA及双色荧光素酶报告检测分析E2A-HLF影响DR4/DR5变化的机制。本课题首次提出"E2A-HLF上调DR4/DR5表达，使t(17;19)-ALL细胞株对TRAIL敏感"的假说，其顺利实施对治疗t(17;19)-ALL有一定指导意义，为早期进行allo-SCT、改善t(17;19)-ALL预后提供理论依据。

背景：allo-SCT后GVL是白血病患者得以治愈的关键反应。TRAIL在GVL效应中发挥重要作用。t(17;19)形成融合基因E2A-HLF。t(17;19)- ALL预后极差，仅早期进行allo-SCT的一例患者长期存活，提示t(17;19)细胞可能对TRAIL敏感。目的：观察t(17;19)-ALL细胞对rhsTRAIL的敏感性，探讨其意义及机制。方法:以t(17;19)- ALL细胞株4株、临床标本1例为实验组，其他ALL细胞株28株为对照组。流式细胞术及RT-PCR测定细胞TRAIL受体表达；3H-thymidine法测定rhsTRAIL对细胞增殖的影响；Annexin-V/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡；免疫印迹法观察细胞凋亡通路；E2A-HLF及两种变异体转染697等细胞，检测TRAIL受体表达及rhsTRAIL对细胞增殖的影响；EMSA及双色荧光素酶检测分析E2A-HLF 影响DR4/DR5变化的机制。结果：t(17;19)- ALL细胞DR4表达水平明显高于其他细胞株 (P<0.05)；DR5表达水平高于MLL+-ALL细胞株(P<0.05)；诱骗受体阴性；rhsTRAIL对t(17;19)-ALL细胞抑制率显著高于其他细胞株(P<0.05或P<0.01)，TRAIL中和抗体RIK-2及caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk阻断该作用；rhsTRAIL使t(17;19)-ALL细胞发生早期凋亡，凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.05)；rhsTRAIL作用2h内caspase-8、Bid、caspase-3、PARP出现活化条带并随作用时间延长增强；E2A-HLF转染697细胞株后DR4及DR5表达上调，细胞株对rhsTRAIL诱导的凋亡敏感，而转染E2A-HLF两种变异体无此变化；E2A-HLF诱导DR4/DR5表达不受NFκB阻断剂LLnL影响；E2A-HLF激活697细胞DR4pro而未充分激活DR5pro。 结论：t(17;19)- ALL细胞高表达DR4、DR5，对rhsTRAIL高度敏感，并最终对移植物抗白血病（GVL）效应敏感。E2A-HLF通过DR4基因起始位点5’上游区诱导DR4基因表达，这一作用有赖于E2A-HLF的DNA结合力及其转录活性。t(17;19)- ALL患者为获得长期存活，应及早进行allo-SCT。