结核抗原CFP-10特异性CD8+T细胞表位鉴定及表型和功能研究

结核是严重危害人类生命和健康的传染病之一，CD4+T和CD8+T细胞在控制结核感染中均发挥着重要作用。目前在对结核病人的研究中发现了结核菌抗原特异性CD4+T细胞，但很难检测到抗原特异性CD8+T细胞。我们前期研究结果证明，结核杆菌培养滤液蛋白-10（CFP-10）除了能诱导结核病人特异性CD4+T细胞应答外，还可显著地诱导CD8+T细胞免疫应答。为了进一步确定结核CFP-10中诱导CD8+T细胞应答的优势表位，我们拟利用合成的CFP-10多肽，分别刺激来源于结核性胸膜炎病人的胸水细胞，通过ELISA/ELISPOT等方法在整体细胞水平、利用FACS在单个细胞水平确定CFP-10中能诱导CD8+T细胞应答的优势表位肽的数目和序列；分析表位肽特异性CD8+T细胞的表型特征、细胞因子产生、T细胞受体表达、穿孔素和颗粒酶的表达以及杀伤功能，为结核疫苗的设计和诊断提供理论和实践依据。

我们前期研究结果证明，结核杆菌培养滤液蛋白-10（CFP-10）除了能诱导结核病人特异性CD4+T 细胞应答外，还可显著地诱导CD8+T 细胞免疫应答。为了进一步确定结核CFP-10 中诱导CD8+T 细胞应答的优势表位，我们利用合成的覆盖CFP-10蛋白全长的26条多肽，分别刺激来源于结核性胸膜炎病人的胸水细胞，通过ELISA/ ELISPOT 等方法在整体细胞水平、利用FACS 最终在单个细胞水平鉴定出四条可诱导CD8+T细胞反应的最短长度为9个氨基酸的单肽；利用上述鉴定出的四条表位肽，我们进一步分析了表位特异性CD8+T细胞的TCRVβ链的组成；分析了表位肽特异性CD8+T细胞的表型及杀伤功能；检测了阳性病人的HLA-Ⅰ类分子的组成，结合生物信息学的方法初步分析了上述表位特异性CD8+T细胞均为HLA-B类分子限制性。我们的研究为新型结核疫苗的设计和结核早期免疫学诊断提供重要理论和实践依据。