扶正消癥方重建免疫微环境抑制上皮性卵巢癌恶性行为的机制研究

Ovarian cancer is the leading cause of gynecologic malignant tumors, it is lack of satisfactory treatment. Our previous clinical study has shown that FuZhengXiaoZhengFang combine with chemotherapy in the treatment of recurrent epithelial ovarian cancer (EOC) can improve the overall survive. However, the specific mechanism is unclear. Single-agent pharmacological studies have shown that the main drug of FuZhengXiaoZhengFang can improve the tumor microenvironment.Thus we speculated that the anti-tumor effects of FuZhengXiaoZhengFang may be related to the reconstruction of EOC microenvironment.This study analyzes the tumor associated macrophage (TAMs) as the breakthrough point, we establish nude mouse model of human ovarian carcinoma to verify the effect of FuZhengXiaoZhengFang and detect the phenotype, quantity and distribution of TAMs in EOC ;we establish SKOV-3 and macrophages co-culture system, to explore the impact of FuZhengXiaoZhengFang on TAMs phenotype, phagocytosis and EOC malignant behaviors; We analyse if TAMs phenotype induce EMT of SKOV-3 and the effect of Fuzhengxiaozhengfang, to explore the impossible mechanisms of the immune microenvironment in invasion, proliferation, migration of ovarian cancer. We hope the study can provide the theory basis of Fuzhengxiaozhen for clinical application. More importantly, it is to explore to establish a clinical feasible Traditional Chinese Medicine strategy of advanced EOC treatment.

卵巢癌是妇科恶性肿瘤的首要死因，目前尚缺乏满意的治疗手段。前期临床研究表明扶正消癥方在治疗复发性上皮性卵巢癌（EOC）上具有良好的化疗增效作用。但其具体作用机制尚不明确。单药药理研究表明扶正消癥方的君药能够改善肿瘤微环境。由此我们推测：该方抗肿瘤作用与重建EOC微环境有关。本研究拟从肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）为切入点，采用动物模型验证扶正消癥方抗EOC作用，并检测不同干预下EOC组织中TAMs的表型、数量及分布；建立SKOV-3与巨噬细胞共培养体系，探讨扶正消癥方对TAMs表型、吞噬能力及对EOC恶性行为的影响；分析TAMs表型对SKOV-3的EMT诱导作用及扶正消癥方的干预作用，明确EOC免疫微环境促进卵巢癌细胞侵袭、增殖、迁移的可能相关机制，以期为扶正消癥方临床推广应用提供理论依据，更重要的是探索建立临床可行的晚期EOC中医药治疗策略，为延缓及控制晚期EOC复发发挥积极作用。

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是女性常见的妇科恶性肿瘤之一，其致死率高居妇科肿瘤之首，有确诊时多为晚期的特点，其中上皮性卵巢癌最常见。前期临床研究表明扶正消癥方在治疗复发性上皮性卵巢癌（EOC）上具有良好的化疗增效作用。但其具体作用机制尚不明确。本研究从肿瘤微环境对巨噬细胞表型和功能的调控作用为切入点，通过动物实验研究扶正消癥方主要作用药物蟾皮的主要成分酯蟾毒配基对EOC的抑瘤作用；建立SKOV-3 与巨噬细胞共培养体系，探讨扶正消癥方的主要药物莪术的主要成分姜黄素对 TAMs 表型、吞噬能力及对卵巢癌细胞恶性行为的影响；分析TAMs 表型对 SKOV-3 的 EMT 诱导作用及姜黄素的干预作用，明确EOC免疫微环境促进卵巢癌细胞侵袭、增殖、迁移的可能相关机制。结果表明：（1）酯蟾毒配基能抑制卵巢癌 SKOV3 细胞裸鼠移植瘤生长，中、高剂量酯蟾毒配基对顺铂抑制卵巢癌 SKOV3 细胞裸鼠移植瘤生长有协同增效作用。（2）酯蟾毒配基通过 PI3K/AKT/CREB 通路，上调 Caspase3 水平，促进卵巢癌 SKOV3细胞凋亡，可能是酯蟾毒配基抑制卵巢癌 SKOV3 细胞增殖的机制。（3）卵巢癌病人腹水中含有大量TAMs，采用免疫磁珠分选法从腹水中分选出TAMs，构建原代TAMs与卵巢癌共培养模型，是一种能更好地反映疾病状态的可行方案。姜黄素能够调控TAMs的极化，降低M2-TAMs的表达，其中以20μM姜黄素效果最为明显。（4）TAMs能够显著促进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力其机制可能与激活TGF-β通路诱导EMT相关。（5）低剂量姜黄素(20μM)主要通过调控TAMs的极化，抑制卵巢癌细胞EMT，从而抑制卵巢癌细胞的迁移、侵袭能力。本研究立足于临床疗效，通过体内、体外实验，探讨了扶正消癥方的主要药物蟾皮、莪术的主要成分抑制肿瘤生长的作用机制，为后期的扶正消癥方治疗卵巢癌的推广应用奠定了一定的理论基础，并为中西医结合治疗卵巢癌的临床治疗进一步提供了更多的科学依据。