尤文肉瘤 ews/fli1融合蛋白转录辅助因子的筛选及其功能鉴定

尤文肉瘤是儿童和青少年常见的恶性骨肿瘤，85%的尤文肉瘤都具有由于特异性染色体易位产生的ews/fli1融合蛋白，而融合蛋白发挥的强转录激活作用，导致大量的靶基因异常转录翻译，同时，融合蛋白影响靶基因转录的过程需要大量辅助转录因子的协同作用，不同的转录因子协同参与不同靶基因的转录激活，从而对尤文肉瘤的不同生物学行为产生影响。本研究拟采用串联亲和纯化的方法检测ews/fli1融合蛋白与细胞蛋白的相互作用，分离和鉴定出和融合蛋白特异性发生作用的蛋白质大分子，验证并确定ews/fli1融合蛋白与细胞蛋白的相互作用结构域，并利用基因功能集合富集度分析方法从基因组水平分析特异性的结合蛋白大分子对融合蛋白转录激活以及细胞整体生物学行为影响。通过对特异性转录辅助因子的筛选和研究，为尤文肉瘤的分子病因学的研究，也为建立在尤文肉瘤胞内信号通路基础上的靶向治疗提供实验基础和理论依据。

尤文肉瘤是儿童和青少年第二常见原发恶性骨肿瘤。即使施以手术化疗放疗相结合的综合治疗，原发尤文肉瘤患者的5 年生存率仍不足50%。95%的尤文肉瘤具有特异性的染色体易位，而85%的易位发生在11 号染色体和22 号染色体之间，从而产生EWS/FLI1 融合基因。EWS/FLI1融合蛋白在肿瘤的形成过程中其重要的作用，它可以通过诱导或者沉默靶基因来诱导或者维持肿瘤的形成。但尤文肉瘤中EWS/FLI1的具体分子机制还不清楚。本课题应用免疫共沉淀技术筛选并鉴定了蛋白X与EWS/FLI1融合蛋白的相互作用。通过文献查询及基因网站测序找出可能与蛋白X相关的microRNA，应用实时定量PCR方法检测发现microRNA34b表达在EWS/FLI-1敲减后尤文肉瘤细胞系有明显降低。因此我们分别在正常及EWS/FLI-1敲减后尤文肉瘤细胞转入micro34b-down及 micro34b-up的慢病毒，发现其增殖能力无明显变化而迁移及侵袭能力的变化明显。本课题首次揭示了蛋白X和microRNA34b可能是EWS/FLI1的下游靶基因，在尤文肉瘤细胞的侵袭及转移过程中起到重要的作用。