膀胱癌DNA修复基因XPC高甲基化导致基因沉默的作用与机制研究

DNA修复基因XPC（xeroderma pigmentosum C,XPC）促进细胞凋亡、细胞周期阻滞或DNA修复等过程，有助于维持基因组稳定性。我们前期工作已首次证实膀胱癌发生、发展与XPC表达缺陷密切相关。基于后续工作中初步发现膀胱癌XPC基因启动子高甲基化线索，本研究将深入探讨膀胱癌XPC基因沉默机制。通过实时PCR、MSP及BSP技术，探明膀胱癌XPC基因高甲基化模式，证实高甲基化导致膀胱癌XPC基因表达沉默。选用ChIP、EMSA技术，筛选与高甲基化XPC基因结合的甲基结合蛋白亚型（methyl-CpG binding protein,MBD）；采取SiRNA-MBD策略，探讨MBD诱发组蛋白去乙酰化，阻碍关键转录因子与XPC基因结合；验证抑制MBD逆转膀胱癌XPC表达缺陷及DNA损伤应答异常。本研究有助于阐明肿瘤高遗传不稳定性机制，有望为膀胱癌早期诊断提供新策略.

DNA 修复基因XPC促进细胞凋亡、细胞周期阻滞或DNA 修复等过程，有助于维持基因组稳定性。为探讨XPC基因缺陷在肿瘤发生中的可能重要作用与调控，本研究我们首次发现并证实XPC在膀胱癌组织中的表达缺陷，同时膀胱癌中XPC的缺陷与病理分级、转移、生存和P53的突变有关，提示XPC可以作为一个独立的预后指标指导临床。进一步，首次探讨XPC在膀胱癌组织中的表达缺陷的分子机制，通过MSP 及BSP 技术，证实XPC启动子在膀胱肿瘤细胞中发生异常甲基化导致XPC在肿瘤细胞中转录抑制。同时，通过开展XPC转录表达调控研究，首次鉴定并证实CREB1作为调控XPC表达的关键转录因子，解析XPC启动子转录因子CREB1的关键结合位点的高甲基化阻碍CREB1发挥对XPC基因转录调控作用可能是导致膀胱癌XPC基因沉默的重要表观遗传机制。另一方面，开展XPC基因多态性与中国人群泌尿系统肿瘤发生、发展的流行病学研究并取得系列重要结果。本研究已完成实验研究工作，已发表论文6篇，其中SCI收录论文 5篇，培养研究生 2名，参加国内外会议交流 3人次，拟发表后续论文1篇。同时有关膀胱肿瘤干细胞的研究初步结果支撑本项目主持人2012年新获得国家自然科学基金面上项目一项。