肺泡表面活性蛋白A通过MyD88通路影响Th17细胞分化及功能在哮喘发病机制中的作用

It was reported that steroid-resistant asthma showed elevated IL-17 and neutrophil infiltration, and TLR/MyD88 signal pathway play important role in Th17 cell differentiation. According to our previous research, asthma model of SP-A knockout mice showed obvious elevated IL-17 and neutrophil infiltration, and SP-A directly inhibited the differentiation of Th17 cells in vitro. In present research, we will discuss the pathway of this phenomenon. In vitro, we will isolate naïve T cells, find out if SP-A will bind TLR2 and TLR4 on them, and if this binding will inactivate MyD88 mediated signal pathway in the T cells, resulting in inhibiting Th17 cell differentiation. In another aspect, we will find if SP-A directly inhibits the function of Th17 cells. In vivo, we will make asthma model using TLR2-/-, TLR4-/-, TLR2/4-/- and MyD88-/- mice to find out if SP-A will influence Th17 cell differentiation through TLR2 and TLR4, and mediated by MyD88 signal pathway. Our results will clarify if inherent substance as SP-A play a role in non-eosinophil asthma, and on adaptive immune responses.

已知激素治疗效果不佳的哮喘多表现为IL-17升高及中性粒细胞的浸润，且TLR/MyD88信号通路在Th17的分化过程中发挥重要作用。我们前期研究发现，SP-A敲除小鼠的哮喘模型IL-17明显升高，中性粒细胞浸润加重, SP-A还能直接抑制Th17细胞的分化。本研究中，拟通过体外分离初始T细胞，研究这一现象的机制是否是SP-A直接作用于初始T细胞上的TLR2及TLR4，通过下游MyD88介导的信号通路，抑制初始T细胞分化成为Th17细胞，从而减少IL-17分泌；以及SP-A是否可以直接作用于Th17细胞，抑制其功能。体内实验中应用SP-A、TLR2、TLR4、TLR2/4及MyD88敲除小鼠再次印证上述通路。本研究结果探讨SP-A作为内源性物质，是否在非嗜酸性粒细胞浸润的难治性哮喘治疗中发挥作用，有助于明确体内的天然物质是否可以直接作用于继发免疫反应而参与哮喘发病过程。

已知激素治疗效果不佳的哮喘多表现为IL-17升高及中性粒细胞的浸润，且有文献报道TLR/MyD88信号通路在Th17的分化过程中发挥重要作用。我们前一项国自然基金的研究中发现，基于SP-A敲除小鼠制备的哮喘模型，其肺部组织及肺门淋巴结中IL-17的水平较野生小鼠哮喘模型明显升高，中性粒细胞浸润加重, 这些结果提示SP-A抑制了Th17细胞的分化。进一步研究发现，SP-A可以直接抑制Th17细胞的分化，但具体机制未明。因此，在本项目研究中，我们旨在探讨SP-A通过何种信号转导途径抑制Th17细胞的分化。既往有研究证实，模式分子识别受体TLR2和TLR4可作为SP-A的受体，且该两种受体在T细胞上表达。因此，首先我们应用Tlr2-/-和Tlr4-/-小鼠，观察了SP-A对其来源的CD4+T细胞诱导分化的影响，我们的结果显示，尽管SP-A能明显抑制野生型CD4+ T细胞IL-17的生成，但不能抑制Tlr2-/-和Tlr4-/-小鼠来源的CD4+ T细胞IL-17的产生。继而，我们建立动物哮喘模型，观察了SP-A对哮喘气道炎症的干预，结果显示，SP-A不能抑制HDM诱导的Tlr2-/-和Tlr4-/-小鼠的气道炎症。这些结果充分提示，SP-A可以通过T细胞上TLR2和TLR4两种受体抑制Th17细胞的分化。为了更进一步地明确SP-A/TLR激活的下游信号通路，我们首先通过WesternBlot分析了SP-A激活的信号分子，发现SP-A能激活MyD88下游MAPK和NF-kB信号通路。与此同时，当MyD88缺陷时，SP-A不能抑制初始型T细胞分化Th17细胞。同样，在基于Myd88-/-小鼠构建的哮喘模型中，SP-A亦不能有效地控制其气道炎症。上述结果充分证明，SP-A可以通过TLR/MyD88信号通路调节T细胞的分化，这可能是其参与控制气道变应炎症的机制。