靶向封闭炎症信号通路防治急性肺损伤的实验研究

核因子（NF）-kB是一种多向性核转录调节蛋白，参与多种炎性介质基因的转录和调控，是炎症免疫反应中众多信号途径的汇聚点。我们前期研究证实NF-kB核移位诱导炎症基因表达在失控性炎症反应（SIRS）/急性肺损伤（ALI）的病理机制中发挥关键作用；拮抗NF-kB活化通路抑制炎症损伤尚无特效药物和成熟手段。本实验运用已成功建立的创伤性ALI家兔模型，选定NF-kB信号通路的关键环节为突破口，利用载体/药物技术，对体内外炎症效应细胞NF-kB核移位识别目的基因kB序列的"颈瓶"通路进行特异性靶向封闭；并用分子生物学、免疫学和形态学等方法证实靶向封闭炎症信号通路、调控炎症基因表达防治SIRS/ALI的可行性和有效性；为创伤性ALI筛选精确药物靶点和寻求高效合理的治疗方案提供实验基础和理论依据。

本研究利用载体/药物技术体外培养肺泡巨噬细胞（AMs），观察dsODNs/Lipofectamine2000对炎症介质表达和对AMs毒性的影响，确定dsODNs/Lipofectamine2000转染的最佳浓度及时间点。并依据上述体外实验确定NF-κB dsODNs转染效率的基础上，应用LPS诱导法建立家兔急性肺损伤（acute lung injury，ALI）模型，靶向封闭NF-κB炎症信号通路，分离培养从肺泡灌洗液中提取的AMs，采用RT-PCR方法检测培养液中各种炎症介质如IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α和VCAM等的mRNA含量的变化，扫描电子显微镜观察肺组织超微结构变化，Western blot法观察NF-κB p65蛋白的核移位情况。结果表明，在炎症的急性期给予NF-κB dsODNs/Lipofectamine2000静脉注射或雾化吸入均可明显抑制AMs中各种炎症介质的表达，有效防止ALI的发生，并具有全身副作用小的特点。本课题为创伤性ALI筛选精确药物靶点和寻求高效合理的治疗方案提供实验基础和理论依据。