化浊祛湿方通过miR-27b/SREBPs、PPARα调节脂代谢靶基因的机制研究

Disorder of lipid metabolism is an independent risk factor for many diseases. Western medicine have precise effect of lipid-lowering, but may tend to cause liver damage and rebound after withdrawal. Huazhuoqushi Decoction (Decoction for resolving turbidity and dispelling dampness) treat the source of phlegm and blood stasis-dampness and turbidity-root cause of dyslipidemia. The clinical studies showed that the prescription worked effectively to reduce patients' CHO and LDL levels,and the mechanism studies found that the effect of CHO reduction is related to liver LDLR expression. LDLR is a newly found target gene of downstream factors-SREBPs & PPARα-in the liver lipid metabolism regulation center(miR-27b) for CHO and TG metabolism. Hence, it is hypothesized that the effect of the prescription on dyslipidemia is through miR-27b/SREBPs and PPARα regulating the target genes in lipid metabolism.To explore the gene targets and molecular mechanism of the prescription on regulating lipid metabolism and provide effective evidence for its preventive application in early stage of dyslipidemia, through techniques of RT-PCR, western blot, the study investigates its effect on expression of miR-27b mRNA, downstream target gene mRNA and proteins, and activity of key enzymes in various sectors by observing the tissue pathological changes,ultra structure，gene transcription and translation level, and enzyme activity level.

脂代谢紊乱是多种疾病的独立危险因素，西药降脂作用虽较确切，但易损害肝功及停药后反弹。化浊祛湿方针对痰、瘀形成的源头"湿浊"先证用药，从源头治理血脂异常。课题申请人前期大量临床研究显示其能有效降低患者CHO、TG水平，机制探讨发现降低CHO作用与增加肝脏LDLR表达有关。LDLR正是最新发现的肝脏脂代谢调控中心"miR-27b"下游SREBPs、PPARα调节CHO、TG代谢的靶基因，因此我们推测化浊祛湿方对脂代谢紊乱的作用是通过miR-27b/SREBPs、PPARα调节相关靶基因实现的。为证明此假说，本研究利用RT-PCR、Western blot等技术检测化浊祛湿方对miR-27b mRNA及其下游脂代谢靶基因表达的影响，从组织病理改变、超微结构、基因转录、翻译水平、酶活性水平等方面研究此方改善脂代谢紊乱的基因靶点及分子机制，为在脂代谢紊乱早期广泛应用化浊祛湿方截断病势提供有效依据。

脂代谢紊乱是多种疾病的独立危险因素，西药降脂作用虽较确切，但易损害肝功及停药后反弹。化浊祛湿方针对痰、瘀形成的源头"湿浊"先证用药，从源头治理血脂异常。课题请人前期大量临床研究显示其能有效降低患者CHO、TG水平，机制探讨发现降低CHO作用与 增加肝脏LDLR表达有关。LDLR正是最新发现的肝脏脂代谢调控中心"miR-27b"下游SREBPs 、PPARα调节CHO、TG代谢的靶基因，因此我们推测化浊祛湿方对脂代谢紊乱的作用是通过miR-27b/SREBPs、PPARα调节相关靶基因实现的。为证明此假说，本研究利用RT-PCR、 Western blot等技术检测化浊祛湿方对miR-27b mRNA及其下游脂代谢靶基因表达的影响，从组织病理改变、超微结构、基因转录、翻译水平、酶活性水平等方面研究此方改善脂代谢紊乱的基因靶点及分子机制，为在脂代谢紊乱早期广泛应用化浊祛湿方截断病势提供有效依据。经研究得到以下结论：（1）采用高脂饲料喂养SD大鼠4周可以成功造成高脂血症模型，具有血清TG、CHO水平显著性升高及肝组织病理学改变。（2）化浊祛湿方可以有效的降低高脂血症大鼠血清TG、CHO，改善肝组织病理结构，其中化浊祛湿方中剂量组显示出最优的治疗效果。（3）化浊祛湿方在调节血脂代谢的同时并不引起肝肾功能的损害，无肝肾毒性。（4）化浊祛湿方可能是通过抑制高脂血症大鼠SREBP1表达，使TG的合成减少；并且通过增加PPARα、HSL表达，使TG的分解增加，从而发挥调节脂代谢的作用，SREBP1、PPARα、HSL可能是化浊祛湿方调节TG代谢紊乱的有效作用靶点。（5）化浊祛湿方可能是通过抑制高脂血症大鼠SREBP-2 mRNA及其信号通路中HMGCR mRNA表达，减少胆固醇过多合成，发挥调解胆固醇代谢的作用。SREBP-2、HMGCR可能是化浊祛湿方调节胆固醇代谢的有效作用靶点。路志正教授用调理脾胃祛湿化浊法，针对痰湿中阻、运化失常等内伤脾胃病理机制，在痰湿尚未形成之前，对痰湿的源头进行早期干预，加强脾胃运化，从源头治起，阻止胆固醇过多合成，实际上是将高脂血症的治疗前移，防止疾病的进一步发展，是中医既病防变、治未病学术思想的具体体现，为高脂血症的临床治疗提供一种思路。