TGF-β1/Smad与MAPK信号通路交叉对话在PSC活化中的作用及柴胡疏肝散抗胰腺纤维化的机制研究

胰腺星状细胞（PSC）活化是慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化的核心事件。近来的研究发现TGF-β1在PSC活化中发挥重要作用，Smad和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路介导了TGF-β1的胞内信号转导，是调控PSC活化的两条重要信号通路，但二者是否协同调控TGF-β1的生物学功能、协同参与PSC活化尚不为所知。拟分离小鼠PSC，采用RNA干扰技术或阻断剂，在分子、细胞水平研究Smad与MAPK通路的相互作用，探明两通路间的交叉对话对PSC活化的影响，以望为CP胰腺纤维化治疗提供新的分子靶点；.柴胡疏肝散是治疗CP临床疗效确切的经方，但其抗胰腺纤维化的机制尚不明确。拟采用尾静脉注射DBTC联合10%乙醇饲喂复制小鼠CP模型，研究柴胡疏肝散是否通过调节TGF-β1/Smad和(或)MAPK通路减轻胰腺纤维化。以阐明柴胡疏肝散防治胰腺纤维化的分子机制，为柴胡疏肝散在CP的临床应用提供理论依据。

本课题采用尾静脉注射DBTC联合10%乙醇饲喂小鼠，可见胰腺组织坏死、炎症细胞浸润及胰腺纤维化的发生，提示小鼠尾静脉注射DBTC联合10%乙醇饲喂可以很好模拟人类慢性胰腺炎（CP）的病理生理过程。本课题首次采用DBTC尾静脉注射联合乙醇在小鼠成功复制了CP胰腺纤维化模型，此方法操作简单,造模成功率高，成本低廉，可作为研究CP发病机制的一种良好的动物模型。.复制CP后，可见各时间点胰腺组织中TGF-β受体（TGF-βRⅠ）的表达均明显增强，以2w升高最为显著，并且可见胰腺组织中 P-ERK、P-JNK、P-P38 的活性表达增强；其中 P-ERK增强最为明显。在慢性胰腺炎模型组p-Smad2/3的表达增强，而Smad7则明显降低， 提示当TGF-β1与膜受体TβR结合后可能通过TGF-β/Smad途径和MAPK途径促进胰腺纤维化的进展。.为了研究TGF-β致胰腺纤维化过程中Smad与丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路的变化，我们分离小鼠胰腺星状细胞（PSC），给予TGF-β1刺激，发现TGF-β1可导致PSC表型呈现活化，Ⅰ型、Ⅲ型胶原及α-SMA表达明显增加； TGF-βⅠ型受体、P-Smad2、P-Smad3、及p38MAPK、P-ERK1/2、P-JNK的的表达明显增加，Smad7明显降低；而采用siRNA沉默Smad4，或采用MAPK的抑制剂后，PSC活化明显减轻，提示Smad和MAPK通路介导了TGF-β1的胞内信号转导，可以作为遏制PSC活化、进而防治胰腺纤维化的靶点。为了验证我们提出的：“Smad与MAPK信号通路在PSC活化过程中存在交叉对话”的假说，我们在PSC的培养液中预先加入Smad4siRNA沉默Smad4，或分别给予ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125、p38抑制剂SB203580，发现Smad与MAPK信号通路在PSC活化过程中的交叉对话主要表现为协同作用，Smad与JNK通路的协同效应在PSC活化中发挥最显著的作用。.柴胡疏肝散是治疗慢性胰腺炎临床疗效确切的方剂，课题研究发现柴胡疏肝散可通过调节TGF-β1/Smad和MAPK通路，影响MMP/TIMP 的表达平衡，减轻胰腺纤维化。本研究结果进一步深化了CP胰腺纤维化的发病机制学说，阐明了柴胡疏肝散防治胰腺纤维化的分子药理机制，为其应用于临床防治CP提供实验依据。