H7N9禽流感病毒HA、NA和M2蛋白的完整表位组扫描作图

A/H7N9 is a highly pathogenic avian influenza virus that has been epidemic in many area of China since 2013, which epitope mapping of its major proteins encoded by H7N9 will be one of research tasks. In this project, the epitomes of H7N9-encoded HA, NA and M2 proteins will be revealed using the biosynthetic peptide method and rabbit sera to each recombinant protein, as well as their conservative and specific epitopes among homologous proteins of Influenza A viruses will be analysed by sequence aligment of each fine epitope motif. In addition, each epitope exposed on surface of each target protein will be determined by analysis of structrual bioinformatics, and the epetopes of cross-reactivity within three mapped epitomes will be screened by using the sera collected from volunteers vaccinated against A/H1N1 and infected A/H7N9. These research results not only will provide novel evidence at the epitope level for the development of 'universal' flu vaccine, but also provide conservative or specific epitopes as much as possible for developing 'universal' flu vaccine or specific diagnostic antigen for H7N9 infection in future. This project also will open a new prospect for the study of avian influenza virus, and add new content of 'epitomics' research, and contribute to form new subject of linear epitope biology.

A/H7N9是2013年起在中国新流行的高致病性禽流感病毒，其主要靶蛋白的表位鉴定将是必然研究内容之一。本项目将用生物合成肽法对H7N9编码蛋白HA、NA和M2进行表位组学研究，以率先揭示它们的完整精细线性表位组。然后通过序列比对，检索出其中在同源蛋白中具100%保守或高保守性的抗体交叉反应性表位，进而确定H7N9特异性表位。另外，通过结构生物信息学分析，确定位于各靶蛋白表面的抗体可及性表位，以及用A/H1N1疫苗接种和A/H7N9感染志愿者血清，筛选表位组中可被识别的抗体交叉反应性表位。这些研究结果不仅可为研制"通用"流感疫苗提供表位水平的新证据，也将为后续研制通用预防性重组多表位肽流感疫苗和H7N9亚型特异性检测抗原，提供尽可能多的候选保守性和/或特异性表位。以上组学研究结果将提供禽流感病毒研究的新视野，拓展线性表位组学研究新内容，并有助于催生新的线性表位生物学。

本项目用生物合成肽法对流感病毒H7N9编码蛋白HA、NA和M2进行表位组学研究，以率先揭示它们的完整精细线性表位组。然后通过序列比对，检索出其中在同源蛋白中具100%保守或高保守性的抗体交叉反应性表位，同时确定H7N9亚型特异性表位。另外，通过结构生物信息学分析，确定位于各靶蛋白表面的抗体可及性表位。2015-2017年，执行了流感病毒H7N9编码血凝素蛋白HA第一轮抗原性肽扫描作图和基质蛋白M2的精细线性表位组草图。2018年，最终产生H7N9-HA 第二轮精细表位组草图，同时通过构建和表达三亚型（H7N9-H1N1-H3N2）重组双拷贝M2胞外区（M2e）蛋白以及制备兔抗血清，在H7N9-M2e鉴定到1个兔M2e多抗识别的高保守性线性表位。关于神经氨酸酶（NA）蛋白，已完成H7N9-NA（包括另一已结题但未实施的H1N1-NA）的表达和抗血清的制备，NA蛋白的精细线性表位组仍在进行中。这些研究结果可为研制“通用”流感疫苗提供表位水平的新证据，也为后续研制通用预防性重组多表位肽流感疫苗和H7N9亚型特异性检测抗原，提供尽可能多的候选保守性和/或型特异性表位。