清热凉血方通过影响Notch信号通路调节T细胞免疫治疗银屑病的机理研究

T细胞活化及Th1型细胞因子的分泌是导致银屑病发生的关键环节，受多种信号通路的调控。最新的研究表明Notch信号通路与银屑病密切相关，本项目组前期工作中也发现Notch信号配体Jagged1蛋白在银屑病患者皮损中较正常皮肤表达增强，提示Notch信号通路在银屑病中处于活化状态。本研究拟从组织、蛋白、基因水平，探讨Notch信号通路在银屑病中的定位、表达及活化情况，筛选出在银屑病中表达异常的Notch分子。并通过分离、培养银屑病患者CD4+T淋巴细胞，建立Notch信号通路激活或抑制的细胞学体外模型，观察清热凉血中药血清的干预对T细胞活化及Th1型细胞因子分泌的影响，探讨清热凉血方是否通过影响Notch信号通路调节T细胞免疫治疗银屑病，并阐明其作用机制，为清热凉血方的临床应用提供客观的实验证据，为银屑病的机理研究提供新方向。

T细胞活化及Th1型细胞因子的分泌是导致银屑病发生的关键环节，受多种信号通路的调控，最新研究表明Notch信号通路与银屑病密切相关，基于前期研究发现Notch信号通路在银屑病中处于活化状态。.本课题从组织、蛋白、基因水平，探讨Notch信号通路在银屑病中的定位、表达及活化情况，筛选出在银屑病中表达异常的Notch分子。并通过分离、培养银屑病患者CD4+T淋巴细胞，建立Notch信号通路激活或抑制的细胞学体外模型，观察清热凉血含药血清的干预对T细胞活化及Th1型细胞因子分泌的影响。.通过研究发现：①Notch信号受体Notch-1、2、3、4，配体Jagged-1、2，DLL-1、3、4在银屑病患者表皮、真皮中表达均较正常人增强；②在血热型（进行期）银屑病患者中Notch-3受体蛋白和Jagged-1，DLL-1，DLL-4配体蛋白均增强，Notch-1、2受体蛋白，DLL-3配体蛋白在血热型银屑病中的表达较对正常人降低。③在血热型银屑病患者外周血中Notch-1、2、3以及Jagged-1蛋白均有表达，且高于正常人对照组，Notch-4以及Jagged-2在两组之间没有差异。④在分离血热型银屑病患者外周血CD4+T淋巴细胞发现，Notch-1受体在基因、蛋白方面均处于高表达状态，在作为一种相关密切基因，通过沉默Notch-1的表达抑制了CD4+T细胞增殖、诱导凋亡和细胞阻滞的作用。⑤并成功运用siRNA及Jagged-1 FC分别刺激CD4+T淋巴细胞，建立Notch信号通路体外抑制及激活模型。⑥清热凉血方高剂量可促进CD4+T淋巴细胞的增殖、抑制其凋亡，且能够降低CD4+T细胞分泌TNF-α、INF-γ分泌水平，增高IL-2的水平。⑦同时初步检测清热凉血方中的化合物，其中丹皮、赤芍、白英、白花蛇舌草可能是本方中起作用的成分。.综上所述，Notch信号受体、配体蛋白可能参与了银屑病的发病过程。其中Notch-1受体基因可能成为银屑病治疗的有效靶点。清热凉血方是治疗血热型寻常性银屑病的有效药物，其单体丹皮、芍药等成分的筛选，为今后清热凉血方的质量控制、稳定其疗效，阐明其作用的物质基础提供了科学依据。针对血热病因病机，治以清热解毒，凉血活血，并通过抑制Th1型免疫反应，提高Th2型免疫反应，纠正Th1/Th2漂移可能是其药效学机制之一。